| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 缩写词表及中药 | 第19-20页 |
| 第一章 研究背景 | 第20-48页 |
| ·"三致"物质的来源 | 第21页 |
| ·突变的种类 | 第21-22页 |
| ·物质致突变性的检测方法 | 第22-23页 |
| ·我国的物质遗传毒性检测方案、体系 | 第23页 |
| ·Ames测试及其它几种基于细菌的物质致突变性检测方法 | 第23-30页 |
| ·Ames测试菌株的特性 | 第24-25页 |
| ·Ames测试菌株的回复突变 | 第25页 |
| ·Ames测试中组氨酸加入量的规定性 | 第25-26页 |
| ·Ames测试方案 | 第26-27页 |
| ·Ames测试对物质致突变性的判断 | 第27页 |
| ·Ames测试结果的有效性 | 第27-28页 |
| ·改进的Ames测试 | 第28页 |
| ·Ames测试检测含有组氨酸物质致突变性时存在的问题及修正方法 | 第28-29页 |
| ·其它几种基于细菌的致突变性检测方法 | 第29-30页 |
| ·哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 | 第30页 |
| ·单细胞凝胶电泳技术 | 第30-31页 |
| ·单细胞凝胶电泳技术的发展与原理 | 第30-31页 |
| ·单细胞凝胶电泳技术的应用 | 第31页 |
| ·MutS蛋白在突变筛选与检测中的应用 | 第31-37页 |
| ·错配修复系统 | 第31-33页 |
| ·MutS蛋白特性与结构 | 第33-35页 |
| ·基于MutS蛋白的突变检测方法 | 第35-37页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第37-39页 |
| ·原理 | 第37-38页 |
| ·应用 | 第38页 |
| ·基于SYBR Cree I荧光染料的实时荧光定量PCR技术 | 第38-39页 |
| ·DNA多态性及基因突变分析方法 | 第39-41页 |
| ·中药及中药的毒理 | 第41-46页 |
| ·中药学的发展史 | 第41页 |
| ·中药分类及毒性 | 第41-42页 |
| ·中药中组氨酸含量的差异性 | 第42页 |
| ·中药的疗效 | 第42-43页 |
| ·中药的毒性 | 第43-46页 |
| ·论文立题依据、可行性分析和主要研究内容 | 第46-48页 |
| ·立题依据 | 第46页 |
| ·可行性分析 | 第46-47页 |
| ·主要研究内容 | 第47-48页 |
| 第一部分 基于表型变化的物质致突变性检测方法 | 第48-90页 |
| 第二章 评价中药潜在致癌性方法的建立 | 第49-79页 |
| ·材料和方法 | 第50-56页 |
| ·试剂、酶与仪器 | 第50页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·溶液配制 | 第50-51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·菌株活化与鉴定 | 第51页 |
| ·中药选取及其制备 | 第51-52页 |
| ·中药内氨基酸含量的测定 | 第52页 |
| ·相对活菌数的统计 | 第52-53页 |
| ·回复子数的统计 | 第53页 |
| ·相对回复突变频率 | 第53页 |
| ·测试菌生理状态与物质的致突变性 | 第53页 |
| ·不同培养条件下TA100生长动力学 | 第53-54页 |
| ·组氨酸量与回复子数 | 第54页 |
| ·TA100相对回复突变频率规律的测定 | 第54页 |
| ·中药抑菌浓度的测定 | 第54页 |
| ·固体法检测中药的致突变性(修改的Ames测试) | 第54页 |
| ·TA100回复子验证 | 第54-56页 |
| ·新方法测定几种中药的致突变性 | 第56页 |
| ·哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-75页 |
| ·固体培养基中组氨酸量与TA100回复子菌落数间效应关系 | 第56-57页 |
| ·物质的致突变性强弱的表现与测试菌的生理状态 | 第57-58页 |
| ·组氨酸浓度对TA100生长的影响及适宜测试体系的探讨 | 第58-59页 |
| ·TA100在不同组氨酸浓度的LB培养基中生长动力学及适宜测试体系的建立 | 第59-60页 |
| ·Ames测试菌的回复突变频率规律的探讨 | 第60-64页 |
| ·诱变剂浓度与测试菌株的相对回复突变频率间剂量效应关系 | 第64-65页 |
| ·适于中药的致突变性检测方法的概述 | 第65页 |
| ·基因型与表型 | 第65-68页 |
| ·苦杏仁及苏木中组氨酸含量 | 第68-69页 |
| ·苦杏仁和苏木的致突变性 | 第69-71页 |
| ·新方法测定中药的致突变性 | 第71-74页 |
| ·哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| 第三章 Ames测试不确定性分析 | 第79-90页 |
| ·材料和方法 | 第79-80页 |
| ·菌株和培养基 | 第79页 |
| ·试剂和仪器 | 第79-80页 |
| ·TA100不同类型回复子的筛选及比例的确定 | 第80页 |
| ·休止细胞的制备 | 第80页 |
| ·不同类型的TA100回复子在液体选择培养基中生长动力学 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-88页 |
| ·Ames测试菌株及致突变物的类型 | 第80-81页 |
| ·定点突变与多点突变 | 第81-82页 |
| ·基因型与表型 | 第82-84页 |
| ·培养时间与回复子菌落数 | 第84-85页 |
| ·Ames测试对物质致突变性的判断标准 | 第85-86页 |
| ·致突变物的胞外浓度与胞内浓度 | 第86页 |
| ·Ames测试检测含组氨酸物质致突变性的结果不确定 | 第86页 |
| ·假阴性及假阳性结论的影响因素 | 第86-88页 |
| ·讨论与结论 | 第88-90页 |
| 第二部分 基于DNA变化的突变检测法 | 第90-141页 |
| 第四章 几种常见的突变检测方法用于检测物质致突变性的可行性探讨 | 第91-101页 |
| ·材料和方法 | 第92-97页 |
| ·菌株和培养基 | 第92页 |
| ·试剂和仪器 | 第92页 |
| ·彗星实验 | 第92-94页 |
| ·SSCP电泳及银染 | 第94-96页 |
| ·测序法检测突变 | 第96-97页 |
| ·结果及分析 | 第97-100页 |
| ·细菌彗星实验检测突变 | 第97页 |
| ·SSCP电泳检测突变 | 第97-98页 |
| ·测序法鉴定突变 | 第98-100页 |
| ·讨论与结论 | 第100-101页 |
| 第五章 应用MutS蛋白筛检突变 | 第101-122页 |
| ·材料和方法 | 第101-110页 |
| ·化学试剂 | 第101页 |
| ·分子克隆用酶、试剂和菌株 | 第101-102页 |
| ·仪器 | 第102页 |
| ·缓冲液 | 第102-103页 |
| ·mutS基因的扩增 | 第103-104页 |
| ·PCR产物与载体pMD18-T simple连接 | 第104页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第104页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第104页 |
| ·重组质粒pMD18-T-S-mutS的筛选与鉴定 | 第104-105页 |
| ·mutS基因与表达载体pET32a(+)连接 | 第105-106页 |
| ·MutS蛋白过量表达与纯化 | 第106-107页 |
| ·蛋白含量及纯度测定 | 第107页 |
| ·MutS蛋白活性检测 | 第107-108页 |
| ·MutS蛋白结合DNA实验及DNA的回收 | 第108-109页 |
| ·实时荧光定量PCR测定回收的DNA的相对量 | 第109页 |
| ·突变检测效率的测定 | 第109-110页 |
| ·结果及分析 | 第110-119页 |
| ·应用MutS蛋白检测突变的实验策略 | 第110页 |
| ·关于MutS蛋白检测突变的一点假设 | 第110页 |
| ·mutS基因克隆及测序验证 | 第110-111页 |
| ·MutS蛋白表达质粒pET32a(+)-mutS的构建及验证 | 第111-112页 |
| ·MutS蛋白纯化 | 第112-113页 |
| ·MutS蛋白活性检测 | 第113-115页 |
| ·MutS蛋白对DNA的亲和性 | 第115-117页 |
| ·基于MutS蛋白与实时荧光定量PCR的突变检测方法 | 第117-118页 |
| ·该方法检测突变的有效性 | 第118-119页 |
| ·基因组范围内未知突变的检测 | 第119页 |
| ·讨论 | 第119-120页 |
| ·结论 | 第120-122页 |
| 第六章 极低比例的突变体检测方法的初步建立 | 第122-141页 |
| ·材料和方法 | 第124-129页 |
| ·菌株和培养基 | 第124页 |
| ·试剂和仪器 | 第124-125页 |
| ·目的DNA片段的扩增 | 第125-126页 |
| ·DNA复性及复性情况判断 | 第126页 |
| ·变性温度与PCR扩增效率 | 第126-127页 |
| ·不对称PCR | 第127-128页 |
| ·激光诱导荧光毛细管电泳-单链构象多态性检测突变 | 第128-129页 |
| ·结果及分析 | 第129-139页 |
| ·DNA片段大小的选择 | 第129页 |
| ·引物的选择 | 第129-130页 |
| ·DNA片段复性 | 第130-133页 |
| ·突变体扩增PCR程序中变性温度的选择 | 第133-135页 |
| ·突变体扩增PCR程序(Mutant-amplifying PCR) | 第135-136页 |
| ·不对称PCR(Asymmetric PCR) | 第136-137页 |
| ·激光诱导荧光毛细管电泳-单链构象多态性检测突变 | 第137-139页 |
| ·讨论及结论 | 第139-141页 |
| 全文总结与展望 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 在读期间发表和投稿的学术论文 | 第157-181页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第181页 |
