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棉花抗逆相关基因的克隆与功能研究及低温胁迫下棉花蛋白质差异表达分析

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 前言第12-35页
   ·植物抗逆分子机制及其研究进展第12-27页
     ·植物应对逆境的分子机制第12-18页
     ·植物对逆境胁迫信号的传导途径第18-22页
     ·植物逆境胁迫应答的基因表达调控第22-25页
     ·植物基因工程提高植物的抗逆性第25-27页
   ·植物蛋白质组学研究进展第27-33页
     ·蛋白质组学产生的背景及其研究内容第27页
     ·蛋白质组学研究的相关技术和方法第27-31页
     ·蛋白质组学在植物抗逆研究中的应用第31-32页
     ·展望第32-33页
   ·立题依据及研究意义第33-35页
第二章 棉花水孔蛋白GhTIP1的克隆及功能分析第35-66页
   ·引言第35-36页
   ·实验材料第36-38页
     ·植物材料第36页
     ·工具酶第36页
     ·常用储存液第36页
     ·常用缓冲液第36页
     ·常用培养基第36-37页
     ·棉花总RNA的提取试剂第37页
     ·PCR扩增分析试剂第37-38页
     ·转膜和Northern杂交所用试剂第38页
     ·实验器材第38页
   ·实验方法第38-46页
       ·GhTIP cDNA分离与鉴定第38页
     ·基因序列分析第38-39页
     ·棉花及烟草材料的准备第39页
     ·RT-PCR反应第39-42页
     ·Northern杂交第42-44页
     ·载体构建实验方法第44-45页
     ·酵母转化试验第45-46页
     ·GhTIP表达载体的构建和烟草转化第46-49页
     ·转基因烟草阳性苗的鉴定第47-48页
     ·转基因烟草的耐逆性分析第48-49页
   ·结果与分析第49-63页
     ·RNA的提取及cDNA的合成第49页
     ·GhTIP基因的生物信息学分析第49-52页
     ·GhTIP基因的组织特异性表达分析第52页
     ·GhTIP基因在根不同发育阶段的表达模式第52-53页
     ·GhTIP1基因在不同非生物胁迫因子条件下的表达模式第53-54页
     ·转基因酵母的抗逆性分析第54-57页
     ·GhTIP1基因转化烟草植株第57-63页
   ·讨论第63-66页
第三章 GhDi19基因的克隆及功能分析第66-84页
   ·引言第66-67页
   ·材料和方法第67-70页
     ·实验材料第67页
     ·GhDi19 cDNA的筛选与分离第67页
     ·基因序列分析第67页
     ·RT-PCR反应第67页
     ·Northern杂交第67页
     ·棉花Genomic DNA的提取—高盐低渗法第67-68页
     ·Genome walker PCR方法调取启动子第68-69页
     ·重组载体PBI101-A和PBI101-B的构建第69页
     ·PBI121-GhDi19表达载体的构建和烟草转化第69页
     ·转基因烟草的鉴定第69-70页
   ·结果与分析第70-82页
     ·GhDi19-1与GhDi19-2的序列及进化关系分析第70-72页
     ·GhDi19蛋白的疏水性分析第72-73页
     ·GhDi19的表达模式分析第73-75页
     ·Genome walker PCR扩增GhDi19-1和GhDi19-2的启动子第75-80页
     ·GhDi19表达载体的构建及烟草转化第80-82页
   ·讨论第82-84页
第四章 低温胁迫下棉花子叶蛋白质的双向电泳分析第84-98页
   ·引言第84-85页
   ·材料与方法第85-91页
     ·试剂的配制第85-86页
     ·棉花材料的处理第86页
     ·蛋白质的提取第86页
     ·Bradford法测蛋白含量第86-87页
     ·双向电泳第87-89页
     ·染色第89-90页
     ·图像的扫描和分析第90-91页
   ·结果与分析第91-93页
     ·总蛋白的分离第91页
     ·蛋白分离的重复性及其效果第91-92页
     ·差异表达蛋白点的分析第92-93页
   ·讨论第93-98页
     ·蛋白样品的制备第93-96页
     ·电泳的条件第96页
     ·低温处理下蛋白点的差异表达第96-98页
第五章 结论第98-99页
参考文献第99-113页
缩略表第113-114页
博士期间发表的论文第114-115页
致谢第115页

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