中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-11页 |
缩略语 | 第11-13页 |
文献综述 | 第13-19页 |
1. 细小病毒B19 的生物学特性 | 第13-15页 |
2. 细小病毒B19 的流行病学及临床表现 | 第15-16页 |
3. B19 病毒的检测 | 第16-17页 |
4. 国内外研究现状 | 第17-19页 |
第一部分 B19 病毒VP2 蛋白的制备 | 第19-49页 |
1. 实验材料 | 第19页 |
2. 实验方法 | 第19-36页 |
·B19 病毒VP2 蛋白的原核表达 | 第19-33页 |
·质粒pMD-VP2N 中VP2 基因密码子的优化 | 第20-26页 |
·原核表达载体的构建 | 第26-28页 |
·VP2 蛋白的原核表达 | 第28-29页 |
·SDS-PAGE 及Western blotting 鉴定VP2 蛋白的表达 | 第29-31页 |
·VP2 蛋白的纯化 | 第31-32页 |
·VP2 蛋白的复性 | 第32-33页 |
·B19 病毒VP2 蛋白的真核表达 | 第33-36页 |
·携带VP2 基因的真核表达载体Ad5-VP2 的构建 | 第33-35页 |
·VP2 在293 细胞中的表达及鉴定 | 第35-36页 |
3. 结果 | 第36-46页 |
·VP2 基因密码子的优化 | 第36-37页 |
·合成的opt-VP2 基因中突变碱基的修复 | 第37-38页 |
·原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
·pET30a(+)-VP2 质粒的构建 | 第38-39页 |
·pET44a(+)-VP2 质粒的构建 | 第39页 |
·VP2 蛋白的原核表达及纯化 | 第39-41页 |
·不含His 标签的VP2 蛋白的表达及纯化 | 第39-41页 |
·含His 标签的VP2 蛋白的表达及纯化 | 第41页 |
·VP2 蛋白的复性 | 第41-43页 |
·穿梭质粒shuttle-VP2 的构建 | 第43-44页 |
·重组腺病毒Ad5-VP2 的制备 | 第44-45页 |
·重组腺病毒Ad5-VP2 的制备及VP2 在293 细胞中的表达及鉴定 | 第45-46页 |
4. 讨论 | 第46-48页 |
5. 小结 | 第48-49页 |
第二部分 人细小病毒B19 抗体检测方法的初步建立 | 第49-66页 |
1. 实验材料 | 第49页 |
2. 实验方法 | 第49-55页 |
·血清中B19 IgG 检测方法的初步建立 | 第49-52页 |
·实验条件的确定 | 第49-52页 |
·IgG 抗体检测方法的建立 | 第52页 |
·血清中B19 IgM 检测方法的初步建立 | 第52-55页 |
·实验条件的确定 | 第53页 |
·IgM 抗体检测方法的建立 | 第53-55页 |
3. 结果 | 第55-63页 |
·血清中B19 IgG 检测方法的初步建立 | 第55-59页 |
·山羊抗人IgG-HRP 稀释比例的确定 | 第55页 |
·抗原包被浓度及封闭液成分的确定 | 第55-56页 |
·IgG 抗体检测方法的建立 | 第56-59页 |
·血清中B19 IgM 检测方法的初步建立 | 第59-63页 |
·兔抗人VP2-HRP 的稀释比例进行确定 | 第59页 |
·IgM 抗体检测方法的建立 | 第59-63页 |
4. 讨论 | 第63-65页 |
5. 小结 | 第65-66页 |
全文总结 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-71页 |
攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第71-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
附录 | 第73-77页 |