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DADS靶向诱导人胃癌细胞分化与周期阻滞及机理研究

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-22页
英文缩写注解第22-23页
引言第23-28页
第一部分 DADS 诱导人胃癌细胞增殖抑制、周期阻滞与分化第28-54页
 1. 材料与方法第28-34页
   ·细胞第28页
   ·主要试剂(盒)第28-29页
   ·主要仪器和设备第29页
   ·方法第29-34页
     ·体外细胞培养第29页
     ·药物处理第29-30页
     ·MTT 比色实验第30页
     ·透射电子显微镜观察第30页
     ·Con A 凝集性实验第30-31页
     ·碱性磷酸酶(ALP)比活性测定第31-32页
     ·细胞骨架蛋白的细胞化学染色第32页
     ·细胞间缝隙连接通讯功能检查-划痕标记荧光染料示踪技术第32-33页
     ·流式细胞仪检测第33页
     ·免疫组化第33页
     ·Western Blot第33页
     ·统计学处理第33-34页
 2. 结果第34-48页
   ·MTT 实验结果第34-35页
   ·电镜观察第35-36页
   ·Con A 的凝集率第36-37页
   ·碱性磷酸酶(ALP)比活性测定第37-38页
   ·细胞骨架结构观察第38-39页
   ·细胞间缝隙连接通讯功能检查-划痕标记荧光染料示踪技术第39-40页
   ·流式细胞仪检测第40-43页
   ·免疫组织化学第43-45页
   ·DADS 诱导 MGC03 细胞磷酸化与总 ERK 表达第45-48页
 3. 讨论第48-53页
 4. 小结第53-54页
第二部分 DADS 对人胃癌 MGC803 和 BGC823 细胞 G_2/M 期检查点激酶通路的影响第54-76页
 1.材料和方法第54-59页
   ·细胞第54页
   ·主要试剂(盒)第54-55页
   ·主要仪器和设备第55-56页
   ·方法第56-59页
     ·体外细胞培养第56页
     ·药物处理第56页
     ·RT-PCR第56-58页
     ·Western blot第58页
     ·免疫共沉淀第58页
     ·统计分析第58-59页
 2. 结果第59-71页
   ·RT-PCR 检测Chk1 和Chk2 在mRNA 水平的改变第59-61页
     ·人胃癌MGC803 和BGC823 细胞Total RNA 鉴定第59页
     ·RT-PCR 检测表达基因第59-61页
   ·Western blot第61-69页
     ·DADS 诱导 MGC803 和 BGC823 细胞 Chk1 和磷酸化 Chk1 表达第61-63页
     ·DADS 诱导 MGC803 和 BGC823 细胞 Chk2 和磷酸化Chk2 表达第63-65页
     ·DADS 诱导BGC823 细胞Chk 下游分子Cdc25C、cyclin 81 的表达第65-67页
     ·DADS 诱导 MGC803 和 BGC823 细胞 ATR 和磷酸化 ATR 表达第67-69页
   ·免疫共沉淀检测 Chk1、Chk2 与 Cdc25C 结合第69-71页
 3. 讨论第71-75页
 4. 小结第75-76页
第三部分 Chk1 和 Chk2 基因沉默对 DADS G_2/M 期阻滞作用及检查点激酶通路的影响第76-98页
 1. 材料和方法第76-83页
   ·细胞第76页
   ·主要试剂(盒)第76-77页
   ·主要仪器和设备第77页
   ·实验图像和数据分析用软件第77-78页
   ·方法第78-83页
     ·体外细胞培养第78页
     ·RNAi 干扰及转染实验第78页
     ·实时荧光定量 PCR第78-82页
     ·Western Blot第82页
     ·MTT 比色实验第82页
     ·流式细胞仪检测第82页
     ·统计分析第82-83页
 2. 结果第83-96页
   ·实时荧光定量PCR 检测RNAi 后Chk1 和Chk2 mRNA 表达的改变第83-87页
   ·Chk1 和Chk2 RNAi 后Chk1 和Chk2 蛋白表达的改变第87-89页
   ·Chk1 、Chk2 基因沉默后MTT 比色实验结果第89-92页
   ·干扰后细胞周期的改变第92-94页
   ·Chk1 和Chk2 RNAi 后下游蛋白表达的改变第94-96页
 3. 讨论第96-97页
 4. 小结第97-98页
结论第98-99页
参考文献第99-112页
综述一第112-128页
综述二第128-140页
攻读博士期间的主要科研成果第140-141页
致谢第141页

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