| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 红细胞血型研究及其发展历史 | 第9-10页 |
| ·输血的发展 | 第9页 |
| ·红细胞血型的发现 | 第9-10页 |
| ·红细胞血型研究的发展 | 第10页 |
| 2 血型抗原及血型系统 | 第10-11页 |
| 3 血型糖蛋白B(GPB) | 第11-13页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第13页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第13-15页 |
| 第一部分 人红细胞血型糖蛋白 B 基因的克隆与真核表达 | 第15-29页 |
| 1 材料 | 第15-16页 |
| ·质粒、细菌、细胞 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-24页 |
| ·GPB 基因的获得 | 第16-17页 |
| ·pTZ57R/T Easy-GPB 载体的构建 | 第17-20页 |
| ·pcDNA3.1-His-Myc A/GPBs 真核表达载体的构建 | 第20-22页 |
| ·重组质粒转染CHO 细胞 | 第22-23页 |
| ·稳定转染GPBs 的CHO 细胞检测 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| ·GPB 基因的获得 | 第24-25页 |
| ·质粒pTZ57R/T Easy-GPB 的构建 | 第25页 |
| ·pcDNA3.1-His-Myc A-GPB 真核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·稳定转染GPBs 的CHO 细胞的检测 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第二部分 GPBs 胞外区多肽抗原的原核表达 | 第29-36页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| ·GPBs 胞外区基因的获得 | 第29-30页 |
| ·原核表达载体pGEX 4T-2 的构建和克隆 | 第30-31页 |
| ·pGEX 4T-2-GPBs 多肽的原核表达 | 第31页 |
| ·pGEX 4T-2-GPBs 原核表达的GST 融合多肽的纯化 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-34页 |
| ·GPBs 胞外区基因的获得 | 第32页 |
| ·构建pGEX 4T-2-GPBs 原核表达载体测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·GST-GPBs 融合蛋白表达检测 | 第33-34页 |
| ·GST-GPBs 融合蛋白的纯化结果 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三部分 GPBs 单克隆抗体的制备 | 第36-46页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-42页 |
| ·免疫小鼠 | 第36-37页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第37页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第37-38页 |
| ·脾淋巴细胞的准备 | 第38页 |
| ·细胞融合及杂交瘤细胞的选择性培养 | 第38-39页 |
| ·杂交瘤细胞的检测 | 第39-41页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第41页 |
| ·单克隆抗体亚型的测定 | 第41-42页 |
| ·单抗的大量制备 | 第42页 |
| ·单克隆抗体对血型的检测 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·杂交瘤株的建立 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第43-44页 |
| ·单抗的类型及效价测定结果 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| ·免疫原 | 第44-45页 |
| ·阳性杂交瘤株的筛选 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第51页 |
