| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-39页 |
| 1 引言 | 第15-16页 |
| 2 昆虫OBPs与CSPs一般特性 | 第16-20页 |
| ·OBPs一般特性 | 第16-18页 |
| ·CSPs一般特性 | 第18-20页 |
| 3 昆虫OBPs与CSPs的表达 | 第20-23页 |
| ·OBPs的表达 | 第20-22页 |
| ·CSPs的表达 | 第22-23页 |
| 4 昆虫OBPs与CSPs的功能 | 第23-26页 |
| ·OBPs的作用机制与生理功能 | 第23-25页 |
| ·CSPs的作用机制与生理功能 | 第25-26页 |
| 5 昆虫OBPs与CSPs的分子结构 | 第26-29页 |
| 6 蜜蜂Apis mellifera的OBPs与CSPS研究进展 | 第29-36页 |
| ·OBPs的研究进展 | 第29-33页 |
| ·CSPs的研究进展 | 第33-34页 |
| ·触角特异蛋白ASP(antennal-specific protein)介绍 | 第34-36页 |
| 7 选题依据与研究意义 | 第36-38页 |
| 8 技术路线 | 第38-39页 |
| 第二章 中华蜜蜂头部cDNA文库的构建 | 第39-50页 |
| 1 引言 | 第39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-46页 |
| ·实验材料与试剂 | 第39-40页 |
| ·中蜂头部总RNA的提取及电泳检测 | 第40页 |
| ·mRNA的分离与纯化(亲和素磁珠法) | 第40-41页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第41-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-49页 |
| ·中蜂触角总RNA提取及RT-PCR | 第46页 |
| ·双链cDNA片段的合成 | 第46-47页 |
| ·不同长度片段双链cDNA的分级分离 | 第47页 |
| ·未扩增文库滴度的测定及插入片段大小 | 第47-48页 |
| ·扩增文库滴度的测定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第三章 中华蜜蜂头部ESTs序列测定与分析 | 第50-69页 |
| 1 引言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-54页 |
| ·实验材料与试剂 | 第50-51页 |
| ·cDNA文库的ESTs测序 | 第51-53页 |
| ·ESTs序列处理及注释分类 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-64页 |
| ·ESTs序列的处理 | 第54-55页 |
| ·ESTs序列的功能注释 | 第55-64页 |
| ·ESTs序列的分类 | 第64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| 第四章 中华蜜蜂主要ASP基因克隆与分析 | 第69-82页 |
| 1 引言 | 第69-70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-74页 |
| ·实验材料与试剂 | 第70页 |
| ·中蜂触角总RNA提取 | 第70页 |
| ·引物设计 | 第70-71页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第71页 |
| ·PCR及其扩增产物的克隆 | 第71-73页 |
| ·中蜂主要ASP基因序列分析 | 第73-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-81页 |
| ·中蜂主要ASP基因PCR扩增 | 第74-75页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第75-76页 |
| ·中蜂主要ASP基因序列分析 | 第76-81页 |
| 4 讨论 | 第81-82页 |
| 第五章 Real-time PCR鉴定中蜂ASP基因转录时空表达 | 第82-100页 |
| 1 引言 | 第82-83页 |
| 2 材料与方法 | 第83-87页 |
| ·实验材料与试剂 | 第83-84页 |
| ·中蜂总RNA的提取及纯化 | 第84-85页 |
| ·引物设计 | 第85页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第85页 |
| ·质粒标准品制备 | 第85-86页 |
| ·Real-time PCR反应体系建立 | 第86-87页 |
| ·数据分析 | 第87页 |
| 3 结果与分析 | 第87-97页 |
| ·质粒标准品定量 | 第87页 |
| ·中蜂总RNA的提取及纯化 | 第87-88页 |
| ·Ac-ASP1转录水平上的时空表达 | 第88-92页 |
| ·Ac-ASP2转录水平上的时空表达 | 第92-94页 |
| ·Ac-ASP3转录水平上的时空表达 | 第94-97页 |
| 4 讨论 | 第97-100页 |
| 第六章 中华蜜蜂主要ASP基因的原核表达及多抗制备 | 第100-111页 |
| 1 引言 | 第100页 |
| 2 材料与方法 | 第100-104页 |
| ·实验材料与试剂 | 第100-101页 |
| ·Ac-ASP原核表达载体的构建与鉴定 | 第101页 |
| ·Ac-ASP融合蛋白的诱导表达 | 第101页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE与Western blot鉴定 | 第101-102页 |
| ·融合蛋白诱导表达的形式分析 | 第102页 |
| ·基于不同表达形式的融合蛋白分离纯化 | 第102-104页 |
| ·融合蛋白的多克隆抗体制备 | 第104页 |
| 3 结果与分析 | 第104-109页 |
| ·Ac-ASP原核表达载体的构建与鉴定 | 第104-106页 |
| ·Ac-ASP融合蛋白的诱导表达及形式鉴定 | 第106-108页 |
| ·Ac-ASP融合蛋白的分离纯化与Western blot鉴定 | 第108-109页 |
| ·Ac-ASP融合蛋白抗血清制备与效价测定 | 第109页 |
| 4 讨论 | 第109-111页 |
| 第七章 中华蜜蜂主要ASP蛋白在触角感器中的免疫定位 | 第111-121页 |
| 1 引言 | 第111-112页 |
| 2 材料与方法 | 第112-114页 |
| ·实验材料与试剂 | 第112页 |
| ·样品固定与SEM观察 | 第112页 |
| ·低温包埋 | 第112-113页 |
| ·超薄切片 | 第113页 |
| ·胶体金间接标记与TEM观察 | 第113-114页 |
| 3 结果与分析 | 第114-119页 |
| 4 讨论 | 第119-121页 |
| 结论 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-138页 |
| 博士期间发表论文(含待发表) | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
