| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-41页 |
| ·作物种质资源研究概况 | 第15-17页 |
| ·作物种质资源创新研究 | 第17-34页 |
| ·作物种质资源创新的必要性 | 第17-19页 |
| ·传统作物种质资源创新的途径 | 第19-21页 |
| ·基于转基因技术的作物种质资源创新 | 第21-34页 |
| ·我国大豆种质资源与遗传改良研究现状 | 第34-38页 |
| ·我国大豆种质资源研究现状 | 第34-35页 |
| ·我国大豆遗传改良研究 | 第35-38页 |
| ·研究目的与意义 | 第38-40页 |
| ·研究的技术路线 | 第40-41页 |
| 第二章 材料与方法 | 第41-53页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·大豆材料 | 第41页 |
| ·水稻材料 | 第41页 |
| ·主要化学试剂、酶类及试剂盒 | 第41-42页 |
| ·培养基、溶液等试剂的配制 | 第42-47页 |
| ·大豆遗传转化主要组织培养基配方 | 第42-43页 |
| ·其它试剂及培养基配方 | 第43-47页 |
| ·主要实验技术 | 第47-53页 |
| ·水稻材料胁迫处理 | 第47页 |
| ·植物叶片总 RNA的分离与检测 | 第47-48页 |
| ·mRNA的分离 | 第48页 |
| ·工程菌液制备 | 第48-49页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR反应 | 第50-51页 |
| ·Southern杂交 | 第51-53页 |
| 第三章 连接有水稻不同cDNA表达载体的构建 | 第53-67页 |
| ·高质量水稻全长cDNA的获得及其末端的改造 | 第53-58页 |
| ·总RNA的提取与检测 | 第53页 |
| ·mRNA的分离 | 第53-54页 |
| ·高质量水稻全长cDNA的合成与质量检测 | 第54-55页 |
| ·水稻ds cDNA片段大小检测 | 第55-57页 |
| ·水稻cDNA测序分析 | 第57页 |
| ·水稻ds cDNA末端的补平 | 第57-58页 |
| ·载体的筛选与改造 | 第58-60页 |
| ·质粒载体筛选的原则 | 第58-59页 |
| ·载体的改造 | 第59-60页 |
| ·含不同大小水稻基因表达载体的工程菌构建 | 第60-62页 |
| ·含不同大小水稻基因表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·连接产物转化农杆菌 | 第61-62页 |
| ·农杆菌单克隆菌液PCR检测平末端连接效果 | 第62页 |
| ·含不同大小水稻基因表达载体的工程菌液制备 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-65页 |
| ·水稻总RNA及mRNA浓度与质量检测结果 | 第62-63页 |
| ·水稻cDNA的获得 | 第63页 |
| ·插入水稻cDNA片段长度的鉴定 | 第63-64页 |
| ·部分水稻cDNA序列分析 | 第64页 |
| ·双元表达载体的酶切鉴定 | 第64页 |
| ·平末端连接效果的检测结果 | 第64-65页 |
| ·T-A连接效果的检测结果 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第四章 农杆菌介导大豆快速高效转化体系的构建 | 第67-76页 |
| ·传统农杆菌介导大豆转化体系的优化 | 第67-70页 |
| ·工程菌液制备 | 第67页 |
| ·大豆种子表面消毒 | 第67-68页 |
| ·大豆种子萌发及不同外植体的获得 | 第68页 |
| ·农杆菌侵染大豆外植体 | 第68页 |
| ·农杆菌与大豆外植体共培养 | 第68页 |
| ·大豆外植体的丛生芽诱导 | 第68-69页 |
| ·大豆外植体的芽伸长诱导 | 第69页 |
| ·大豆外植体的生根诱导 | 第69页 |
| ·大豆外植体的移栽 | 第69页 |
| ·发芽培养基中6-苄氨基嘌呤的优化 | 第69页 |
| ·诱导培养基中激素浓度的优化 | 第69页 |
| ·其它因子的优化 | 第69-70页 |
| ·快速、高效农杆菌介导大豆转化体系的构建 | 第70-71页 |
| ·工程菌液制备 | 第70页 |
| ·大豆种子表面消毒 | 第70页 |
| ·大豆种子萌发及外植体的获得 | 第70页 |
| ·农杆菌侵染大豆外植体 | 第70页 |
| ·农杆菌与大豆外植体共培养 | 第70页 |
| ·大豆外植体的移栽 | 第70页 |
| ·大豆不同基因型的比较 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-76页 |
| ·农杆菌介导大豆子叶节和胚尖转化系统的优化 | 第71-74页 |
| ·快速、高效农杆菌介导大豆转化体系的建立 | 第74-76页 |
| 第五章 携带水稻CDNA大豆转基因植株的检测 | 第76-81页 |
| ·携带水稻cDNA大豆转基因植株的获得 | 第76页 |
| ·大豆转基因株系的表型鉴定 | 第76页 |
| ·大豆转基因株系组织化学GUS基因表达鉴定 | 第76-77页 |
| ·大豆转基因株系的分子鉴定 | 第77页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第77页 |
| ·RT-PCR检测 | 第77页 |
| ·Southern检测 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-81页 |
| ·大豆转化再生植株的表型鉴定 | 第77页 |
| ·大豆转化再生植株的组织化学和分子鉴定 | 第77-81页 |
| 第六章 讨论 | 第81-88页 |
| ·基于水稻全长cDNA的大豆种质创新技术体系的建立 | 第81-85页 |
| ·高质量水稻全长cDNA的获得 | 第81-82页 |
| ·载体的筛选和改造 | 第82页 |
| ·快速、高效农杆菌介导大豆转基因技术体系的建立 | 第82-85页 |
| ·基于水稻全长cDNA的大豆种质创新技术体系的验证 | 第85页 |
| ·本研究大豆种质创新技术体系存在的问题 | 第85-86页 |
| ·cDNA序列的完整性 | 第85-86页 |
| ·cDNA片段分级准确性 | 第86页 |
| ·cDNA“基因池”的容量 | 第86页 |
| ·今后研究计划 | 第86-88页 |
| ·技术体系的完善 | 第86-87页 |
| ·技术体系的应用 | 第87-88页 |
| 第七章 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-103页 |
| 附录 | 第103-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |