白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 1 绪论 | 第12-32页 |
| ·花发育分子遗传学的研究进展 | 第12-23页 |
| ·花发育分子遗传学的兴起 | 第12-15页 |
| ·建立在模式植物基础上的花发育分子遗传学 | 第15-21页 |
| ·花发育相关基因的分化 | 第21-23页 |
| ·基因克隆的快捷策略 | 第23-29页 |
| ·同系位候选法 | 第24页 |
| ·全长cDNA文库构建 | 第24-26页 |
| ·差接式快捷基因克隆法 | 第26-27页 |
| ·RACE | 第27-29页 |
| ·白桦生殖生物学的研究 | 第29-30页 |
| ·本研究的目的意义 | 第30-32页 |
| 2 白桦花期抑制性消减文库的构建及EST分析 | 第32-49页 |
| ·实验材料、试剂和设备 | 第32-34页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·酶及化学试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-42页 |
| ·白桦花序总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·反转录 | 第35-36页 |
| ·cDNA扩增 | 第36页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切 | 第36-37页 |
| ·Tester cDNA加接头 | 第37-38页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第38页 |
| ·抑制性消减文库的建立 | 第38-39页 |
| ·重组体插入片段长度的PCR检测 | 第39-40页 |
| ·测序模板制备 | 第40-41页 |
| ·测序反应 | 第41-42页 |
| ·EST处理及冗余度计算 | 第42页 |
| ·实验结果和分析 | 第42-46页 |
| ·白桦总RNA的提取 | 第42页 |
| ·白桦cDNA的扩增 | 第42-43页 |
| ·白桦cDNA的酶切 | 第43页 |
| ·接头连接检测 | 第43-44页 |
| ·抑制性消减杂交产物的PCR检测 | 第44页 |
| ·插入片段检测 | 第44-45页 |
| ·EST处理及文库分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·影响文库质量的因素 | 第46页 |
| ·花发育相关EST | 第46-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 3 花发育相关基因的克隆 | 第49-62页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·RT-PCR法克隆白桦花发育相关基因 | 第49-50页 |
| ·RACE策略克隆花发育相关基因 | 第50-52页 |
| ·实验结果 | 第52-61页 |
| ·RT-PCR结果 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR候选基因序列分析 | 第53-55页 |
| ·RACE操作cDNA编码区全长的获得 | 第55-56页 |
| ·RACE操作候选基因序列分析 | 第56-59页 |
| ·其它基因序列分析 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 4 花发育相关基因的时序表达分析 | 第62-70页 |
| ·材料介绍 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-64页 |
| ·总RNA提取 | 第62-63页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第63页 |
| ·标准样制备 | 第63页 |
| ·实时定量PCR | 第63-64页 |
| ·结果和分析 | 第64-68页 |
| ·RNA提取 | 第64页 |
| ·标准样检测 | 第64-65页 |
| ·实时定量标准曲线 | 第65页 |
| ·目标基因表达丰度曲线 | 第65-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·外标定量在本实验中的应用 | 第68页 |
| ·目标基因的表达分析 | 第68-69页 |
| ·文库构建中的假阳性问题的体现 | 第69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 附录A | 第80-81页 |
| 附录B | 第81-84页 |
| 附录C | 第84-87页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
