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苏云金杆菌晶体蛋白对猪蛔虫的作用及猪蛔虫重组As37蛋白的免疫保护研究

中文摘要第1-13页
Abstract第13-16页
缩略词表第16-18页
第1章:文献综述第18-45页
   ·苏云金芽胞杆菌防治猪蛔虫病的研究及前景第18页
   ·猪蛔虫及猪蛔虫病第18-28页
     ·蛔虫的生物学分类第18-19页
     ·猪蛔虫的生活史第19-20页
     ·猪蛔虫的流行病学第20-21页
     ·猪蛔虫病的症状第21页
     ·猪蛔虫病的病理变化第21-22页
     ·猪蛔虫病的诊断第22-23页
     ·猪蛔虫病的防治第23-24页
       ·猪蛔虫病的药物防治第23-24页
       ·猪蛔虫病的综合防治第24页
     ·猪蛔虫的分子生物学研究第24-27页
     ·猪蛔虫的免疫研究第27-28页
   ·苏云金芽胞杆菌第28-45页
     ·苏云金芽胞杆菌简介第28页
     ·苏云金芽胞杆菌的分类及地理分布第28-29页
     ·苏云金芽胞杆菌的毒素第29-30页
     ·杀虫晶体蛋白的发现第30-31页
     ·杀虫晶体蛋白的形态及生物学特征第31-32页
     ·杀虫晶体蛋白的结构、功能及基因分类第32-35页
       ·杀虫晶体蛋白的结构、功能第32-34页
       ·杀虫晶体蛋白的基因分类第34-35页
     ·伴胞晶体蛋白的杀虫机制第35-40页
       ·杀虫晶体蛋白的溶解第36-37页
       ·晶体蛋白的酶解及活化第37页
       ·活化毒素与特异受体结合第37-38页
       ·昆虫中肠细胞的穿孔及裂解第38-39页
       ·杀虫晶体蛋白毒素引起昆虫的病理变化第39-40页
     ·杀虫晶体蛋白对动植物寄生线虫的研究应用第40-45页
       ·伴胞晶体蛋白对线虫作用的发现第40-41页
       ·杀线虫晶体蛋白及其基因第41-43页
       ·杀虫晶体蛋白对线虫的作用机理第43-45页
第2章:Bt伴胞晶体毒素对体外培养的猪蛔虫幼虫的毒力第45-61页
   ·研究的目的和意义第45页
   ·材料与方法第45-49页
     ·材料第45-47页
       ·菌株第45-46页
       ·供试动物第46页
       ·供试寄生虫第46页
       ·实验所用主要仪器第46页
       ·培养基第46页
       ·抗生素第46页
       ·主要溶液及试剂的配制第46-47页
     ·方法第47-49页
       ·猪蛔虫感染性虫卵的培养第47页
       ·苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的制备第47-48页
       ·大肠杆菌中晶体蛋白的制备第48页
       ·晶体蛋白含量的测定第48页
       ·晶体蛋白的SDS-PAGE第48-49页
       ·猪蛔虫三期、四期幼虫的获得第49页
       ·猪蛔虫三期及四期幼虫的体外培养及伴胞晶体的加入第49页
   ·结果与分析第49-57页
     ·感染性猪蛔虫卵的获得第49页
     ·供试菌株伴胞晶体蛋白的组成第49-50页
     ·不同晶体蛋白对猪蛔虫三期幼虫的作用第50-54页
     ·不同晶体蛋白对猪蛔虫四期幼虫的作用第54-57页
   ·讨论第57-60页
     ·关于猪蛔虫卵的培养及其感染性第57-58页
     ·关于伴胞晶体毒素的溶解性第58页
     ·关于伴胞晶体毒素对体外培养的猪蛔虫幼虫的作用第58-60页
   ·小结第60-61页
第3章:伴胞晶体蛋白对小鼠体内猪蛔虫幼虫不同作用方式驱虫效果的研究及其免疫定位第61-73页
   ·研究的目的和意义第61页
   ·材料与方法第61-66页
     ·材料第61-63页
       ·感染性猪蛔虫卵第61页
       ·供试菌株第61页
       ·供试动物第61-62页
       ·主要仪器及设备第62页
       ·主要试剂及配制第62-63页
     ·方法第63-66页
       ·苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的制备及浓度测定第63页
       ·晶体蛋白抗体的制备及纯化第63-65页
       ·动物实验第65页
       ·石蜡切片的制作第65-66页
       ·免疫组化实验第66页
   ·结果与分析第66-70页
     ·YBT-1517晶体蛋白对小鼠体内蛔虫的作用第66-68页
     ·YBT-1518晶体蛋白对小鼠体内蛔虫的作用第68-69页
     ·感染蛔虫小鼠肝脏切片的H.E染色第69-70页
     ·免疫组化方法定位YBT-1517晶体蛋白的分布第70页
   ·讨论第70-71页
   ·小结第71-73页
第4章:晶体蛋白对猪体内蛔虫的作用及其血液理化指标分析第73-82页
   ·研究目的及意义第73页
   ·材料与方法第73-75页
     ·材料第73-74页
       ·供试菌株第73页
       ·供试动物第73页
       ·主要仪器设备及试剂第73-74页
       ·感染性猪蛔虫卵第74页
     ·方法第74-75页
       ·晶体蛋白的制备及浓度测定第74页
       ·感染性猪蛔虫卵对猪人工感染实验第74页
       ·猪血液生理生化指标的测定第74页
       ·粪便中虫卵的收集及计数第74-75页
       ·数据处理第75页
   ·结果与分析第75-80页
     ·临床症状的观察第75页
     ·各项生理生化指标的变化第75-79页
       ·猪感染蛔虫后生理指标的变化第75-76页
       ·猪感染蛔虫早期血液生化指标的变化第76-79页
         ·LDH(乳酸脱氢酶)的变化第76-77页
         ·GOT(谷草转氨酶)的变化第77-78页
         ·GPT(谷丙转氨酶)的变化第78-79页
         ·ALP(碱性磷酸酶)的变化第79页
     ·猪粪便中虫卵计数第79-80页
   ·讨论第80-81页
   ·小结第81-82页
第5章 猪蛔虫rAs37基因的克隆及原核表达第82-97页
   ·研究目的及意义第82页
   ·试验材料第82-86页
     ·菌种与质粒第82-83页
     ·主要药品与试剂第83-84页
     ·主要培养基第84页
     ·引物第84页
     ·酶及试剂盒第84页
     ·RNA提取试剂第84页
     ·质粒抽提与鉴定试剂第84-85页
     ·SDS-PAGE相关溶液第85页
     ·包涵体提取相关溶液第85页
     ·Western-blot相关溶液第85页
     ·兔抗猪蛔虫阳性血清第85-86页
   ·试验方法第86-89页
     ·猪蛔虫总RNA的提取第86页
     ·RT-PCR法扩增rAs37基因第86页
     ·PCR产物的回收与纯化第86-87页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第87页
     ·PCR产物的克隆第87页
     ·连接产物的转化第87页
     ·质粒的小量制备第87-88页
     ·重组质粒的酶切鉴定第88页
     ·重组表达质粒pGEX-KG-As37的构建第88页
     ·As37蛋白的表达与纯化第88-89页
       ·诱导表达第88页
       ·表达条件的优化第88-89页
       ·表达产物的SDS-PAGE检测第89页
       ·包涵体的提纯与复性第89页
       ·表达产物的Western-blot分析第89页
   ·试验结果第89-94页
     ·猪蛔虫rAs37基因的PCR扩增第89-90页
     ·基因与pBS-T载体的连接与鉴定第90-91页
     ·rAs37基因重组表达载体pGEX-KG-As37的筛选与鉴定第91-92页
     ·pGEX-KG-As37在大肠杆菌E.coli BL21中的表达第92页
     ·表达条件的优化第92-94页
     ·表达产物的Western-blot分析第94页
   ·分析与讨论第94-96页
     ·猪蛔虫rAs37基因的克隆第94页
     ·rAs37基因原核表达载体的构建第94-95页
     ·融合蛋白的表达及包涵体的提取与纯化第95-96页
   ·小结第96-97页
第6章 猪蛔虫重组表达蛋白的免疫保护研究第97-107页
   ·研究目的及意义第97页
   ·材料与方法第97-100页
     ·材料第97-98页
       ·试验动物第97页
       ·供试寄生虫第97页
       ·主要试剂第97-98页
       ·主要溶液的配制第98页
       ·主要实验器材第98页
     ·方法第98-100页
       ·动物的免疫第98-99页
       ·动物的攻虫试验第99页
       ·幼虫的分离及计算第99页
       ·最佳包被抗原浓度及血清稀释倍数的确定第99页
       ·ELISA敏感性实验第99页
       ·ELISA阴阳性界限的确定第99页
       ·鼠血清IgG的ELISA检测第99-100页
       ·数据处理第100页
   ·结果与分析第100-104页
     ·免疫保护试验第100页
     ·包被抗原和抗体最佳工作浓度测定第100-101页
     ·已知猪蛔虫阳性血清ELISA效价测定第101-102页
     ·健康猪血清的检测第102页
     ·免疫前后鼠血清IgG的ELISA检测结果第102-104页
   ·讨论第104-106页
     ·关于重组蛋白的免疫保护性第104页
     ·关于猪蛔虫病ELISA检测方法的建立第104-106页
   ·小结第106-107页
总结第107-108页
参考文献第108-122页
致谢第122页

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