| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-45页 |
| ·猪轮状病毒的概况 | 第13-16页 |
| ·轮状病毒主要蛋白的结构与功能 | 第16-22页 |
| ·轮状病毒流行病学 | 第22-27页 |
| ·国内外轮状病毒转基因植物的研究现状 | 第27-30页 |
| ·植物转化系统研究进展 | 第30-43页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第43-45页 |
| 第二章 技术路线 | 第45-46页 |
| 第三章 VP6蛋白的原核表达 | 第46-58页 |
| ·实验材料 | 第46-49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·大肠表达杆菌BL21(DE_3)Plyss感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·碱裂解法少量提取pGEM-T-Easy-VP6重组质粒DNA | 第50页 |
| ·pGEM-T-Easy-VP6酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·VP6 PCR扩增 | 第51页 |
| ·CTAB法回收酶切VP6,pET-5a的DNA | 第51页 |
| ·VP6与pET5a连接 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第52页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第52页 |
| ·VP6基因的表达 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-56页 |
| ·重组质粒pGEM-T-Easy-VP6酶切 | 第52-53页 |
| ·VP6基因PCR扩增 | 第53页 |
| ·重组表达质粒pET5a-VP6酶切 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第54-55页 |
| ·pET5a原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四章 VP6基因植物表达载体的构建 | 第58-69页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-61页 |
| ·引物设计 | 第58-59页 |
| ·VP6的PCR扩增 | 第59页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第59-60页 |
| ·CTAB法分别回收VP6和pBI121载体的DNA片段 | 第60页 |
| ·VP6与pBI121连接反应 | 第60页 |
| ·pBI121-VP6重组质粒转化 | 第60页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第60-61页 |
| ·测序 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-67页 |
| ·VP6基因PCR扩增 | 第61页 |
| ·重组表达质粒pBI121-VP6 DNA酶切 | 第61-62页 |
| ·序列分析 | 第62-66页 |
| ·植物表达载体pBI121的构建 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第五章 烟草和紫花苜蓿转化及卡那霉素抗性苗筛选 | 第69-84页 |
| ·实验材料 | 第69-71页 |
| ·实验方法 | 第71-74页 |
| ·无菌试管苗切段扩繁 | 第71页 |
| ·根癌农杆菌转化NC89烟草和紫花苜蓿 | 第71-74页 |
| ·结果 | 第74-81页 |
| ·农杆菌转化 | 第74页 |
| ·烟草转化 | 第74-75页 |
| ·紫花苜蓿转化 | 第75-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第六章 转基因烟草的分子检测 | 第84-100页 |
| ·实验材料 | 第84-87页 |
| ·实验方法 | 第87-93页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第87-88页 |
| ·转基因植株RT-PCR鉴定 | 第88-89页 |
| ·转基因烟草PCR-Southern检测 | 第89-91页 |
| ·转基因烟DNA的点杂交检测 | 第91-92页 |
| ·转基因烟草蛋白的Western-blotting检测 | 第92-93页 |
| ·结果 | 第93-97页 |
| ·植物总DNA | 第93页 |
| ·转基因烟草的VP6的PCR扩增 | 第93-94页 |
| ·植物总RNA | 第94页 |
| ·转基因烟草的VP6的RT-PCR扩增 | 第94-95页 |
| ·DIG标记探针的检测 | 第95页 |
| ·转基因烟草的PCR-Southern杂交检测 | 第95-96页 |
| ·转基因烟草的Dot-blotting杂交检测 | 第96-97页 |
| ·转基因烟草的Western-blotting检测 | 第97页 |
| ·讨论 | 第97-99页 |
| ·小结 | 第99-100页 |
| 第七章 讨论 | 第100-105页 |
| 第八章 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简介 | 第115页 |
