| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写词 | 第11-12页 |
| 化学试剂 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-37页 |
| 第一节 植物细胞外钙调素信号研究进展 | 第13-18页 |
| 1.植物界已发现的多肽信号分子 | 第13-14页 |
| 2.植物细胞外钙调素的发现及存在的普遍性 | 第14-15页 |
| 3.植物细胞外CaM的生物学功能 | 第15-16页 |
| 4.胞外CaM的跨膜信号转导机制 | 第16-18页 |
| ·细胞表面存在受体 | 第16页 |
| ·细胞外CaM可能的信号转导机制 | 第16-18页 |
| 第二节 植物细胞活性氧代谢及保卫细胞活性氧信号研究进展 | 第18-29页 |
| 1.活性氧的产生 | 第18-21页 |
| ·细胞质膜电子传递系统或质膜氧化还原系统是产生H_2O_2的重要部位 | 第18-20页 |
| ·叶绿体通过光化学反应产生H_2O_2 | 第20-21页 |
| ·过氧化物酶(POD)产生H_2O_2 | 第21页 |
| ·活性氧产生的其他途径 | 第21页 |
| 2.活性氧的清除机制 | 第21-22页 |
| ·活性氧的酶促清除机制 | 第21-22页 |
| ·活性氧的非酶促清除机制 | 第22页 |
| 3.保卫细胞活性氧信号研究进展 | 第22-28页 |
| ·保卫细胞信号转导的研究方法 | 第22-23页 |
| ·保卫细胞H_2O_2信号转导研究进展 | 第23-28页 |
| 4.展望 | 第28-29页 |
| 第三节 植物细胞G蛋白信号转导研究进展 | 第29-37页 |
| 1.异三聚体G蛋白的活化机制 | 第29-30页 |
| ·GPCR与G蛋白 | 第29-30页 |
| ·调节因子 | 第30页 |
| 2.G 蛋白的研究方法 | 第30-31页 |
| ·GTP结合实验(GTP-binding assay) | 第30页 |
| ·GTPase活性实验(GTPase assay) | 第30-31页 |
| ·细菌毒素诱导的核糖基化实验(ADP-ribosylation assay) | 第31页 |
| ·免疫转移电泳实验(western blot assay) | 第31页 |
| 3.植物异三聚体G蛋白信号转导研究进展 | 第31-36页 |
| ·植物基因组G蛋白信号基因 | 第31-32页 |
| ·G蛋白和离子通道 | 第32-34页 |
| ·G蛋白与细胞增殖 | 第34-35页 |
| ·G蛋白与光信号 | 第35-36页 |
| 4.结论和展望 | 第36-37页 |
| 第二章 研究论文 | 第37-86页 |
| 第一部分 异三聚体G蛋白α亚基和H_2O_2在ABA和细胞外CaM保卫细胞信号转导中的关系 | 第37-70页 |
| 材料和方法 | 第38-43页 |
| 1.实验材料及种植方法 | 第38-39页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·种植方法 | 第38-39页 |
| 2.植物基因组DNA小量提取 | 第39页 |
| ·Reverse PCR或Southern Blot 用DNA小量提取 | 第39页 |
| ·PCR鉴定突变体用DNA小量提取 | 第39页 |
| 3.拟南芥杂交及后代筛选鉴定 | 第39-40页 |
| 4.PCR扩增目的片断 | 第40页 |
| 5.表皮条生物分析 | 第40页 |
| 6.激光共聚焦显微技术(CLSM)测定保卫细胞内H_2O_2的变化 | 第40-41页 |
| ·荧光染料的负载 | 第40-41页 |
| ·激光共聚焦显微镜记录保卫细胞内H_2O_2的变化 | 第41页 |
| 7.RNA的提取及半定量检测基因转录本的表达 | 第41-42页 |
| ·RNA的提取 | 第41页 |
| ·RT-PCR半定量检测基因转录本的表达 | 第41-42页 |
| 8.引物合成 | 第42页 |
| 9.叶片失水状况分析 | 第42-43页 |
| 结果与分析 | 第43-64页 |
| 1.ABA对气孔运动的影响 | 第43-44页 |
| 2.细胞外CaM对拟南芥气孔运动的影响 | 第44-45页 |
| 3.Gα介导ABA和细胞外CaM诱导气孔关闭的过程 | 第45-47页 |
| 4.H_2O_2对气孔运动的影响 | 第47-52页 |
| ·不同浓度H_2O_2对气孔运动的影响 | 第47-48页 |
| ·H_2O_2对ABA和细胞外CaM诱导气孔关闭过程的影响 | 第48-49页 |
| ·AtrbohD、AtrbohF参与细胞外CaM诱导气孔关闭的过程 | 第49-50页 |
| ·ABA和细胞外CaM促进保卫细胞H_2O_2升高 | 第50-51页 |
| ·AtrbohD、AtrbohF基因参与细胞外CaM诱导保卫细胞H_2O_2产生的过程 | 第51-52页 |
| 5.Gα对ABA和细胞外CaM诱导保卫细胞内H_2O-2升高过程的影响 | 第52-56页 |
| ·Gα突变体和超表达株系保卫细胞H_2O_2基础含量 | 第52-53页 |
| ·Gα参与ABA和细胞外CaM诱导保卫细胞内H_2O_2升高的过程 | 第53-55页 |
| ·CAT和DPI在细胞外CaM诱导气孔关闭中的作用 | 第55-56页 |
| 6.gpal-2中AtrbohD、AtrbohF转录水平的鉴定 | 第56-57页 |
| 7.H_2O_2诱导气孔关闭的下游信号 | 第57-59页 |
| ·H_2O_2诱导气孔关闭过程中需要Gα参与 | 第57页 |
| ·Cα~(2+)介导H_2O_2和Gα诱导气孔关闭的过程 | 第57-59页 |
| 8.叶片失水状况分析 | 第59-61页 |
| 9.g/d/f和w/d/f三重突变体PCR鉴定 | 第61-64页 |
| ·g/d/f三重突变体PCR鉴定 | 第61-63页 |
| ·w/d/f三重突变体PCR鉴定 | 第63-64页 |
| 讨论 | 第64-70页 |
| 1.细胞外CaM能诱导拟南芥气孔关闭 | 第64页 |
| 2.Gα参与ABA和细胞外CaM诱导气孔关闭的过程 | 第64-65页 |
| 3.H_2O_2参与ABA和细胞外CaM诱导气孔关闭的过程 | 第65-66页 |
| 4.G α可能参与ABA或细胞外CaM诱导胞内H_2O_2升高的过程 | 第66-67页 |
| 5.H_2O_2下游的信号分子 | 第67-68页 |
| 6.离体叶片失水状况 | 第68-70页 |
| 第二部分 ABI1参与细胞外CaM诱导气孔关闭的过程及与GPA1之间的关系 | 第70-86页 |
| 材料和方法 | 第70-71页 |
| 1.实验材料及种植方法 | 第70页 |
| 2.植物基因组DNA小量提取同第一部分 | 第70页 |
| 3.拟南芥杂交及后代筛选鉴定同第一部分 | 第70页 |
| 4.PCR扩增目的片断同第一部分 | 第70-71页 |
| 5.表皮条生物分析同第一部分 | 第71页 |
| 6.激光共聚焦显微技术(CLSM)测定保卫细胞内H_2O_2的变化同第一部分 | 第71页 |
| 7.RNA的提取及半定量检测基因转录本的表达同第一部分 | 第71页 |
| 8.引物合成 | 第71页 |
| 9.DNA酶切 | 第71页 |
| 10.叶片失水状况分析同第一部分 | 第71页 |
| 11.种子萌发和子叶发生率实验 | 第71页 |
| 结果与分析 | 第71-83页 |
| 1.细胞外CaM不能诱导abil-1气孔关闭 | 第71-72页 |
| 2.abil-1阻断了细胞外CaM诱导保卫细胞H_2O_2升高的过程 | 第72-73页 |
| 3.abil-1与gpal-2、cGα杂交突变体的鉴定及基础生理指标测定 | 第73-75页 |
| ·abil-1与gpal-2、cGα杂交双重突变体的鉴定 | 第73-74页 |
| ·a/g、a/c双重突变体气孔运动基础生理指标的测定 | 第74-75页 |
| ·a/g、a/c双重突变体对生长发育的影响 | 第75页 |
| 4.ABA和细胞外CaM对a/g、a/c气孔运动的影响 | 第75-76页 |
| 5.细胞外CaM对a/g、a/c保卫细胞H_2O_2含量的影响 | 第76-77页 |
| 6.H_2O_2对a/g、a/c气孔运动的影响 | 第77-78页 |
| 7.离体叶片失水状况 | 第78-79页 |
| 8.转录水平鉴定 | 第79-80页 |
| 9.种子萌发和幼苗子叶发育的ABA信号 | 第80-83页 |
| ·ABA对种子萌发的影响 | 第80-81页 |
| ·ABA对幼苗发育的影响 | 第81-83页 |
| 讨论 | 第83-86页 |
| 第三章 结论与展望 | 第86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 个人简历 | 第100页 |
