| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 序论 | 第11-40页 |
| ·D-泛解酸内酯水解酶 | 第11-12页 |
| ·D-泛解酸内酯水解酶的来源及研究概况 | 第11-12页 |
| ·D-泛解酸内酯水解酶的实际应用 | 第12页 |
| ·D-泛酸简介 | 第12-15页 |
| ·D-泛酸用途及市场概况 | 第12-13页 |
| ·国内外D-泛酸生产技术发展概况和发展趋势 | 第13-15页 |
| ·酶的定向进化简述 | 第15-38页 |
| ·酶的定向进化的产生及定义 | 第15-18页 |
| ·定向进化的原理及目的 | 第18-19页 |
| ·酶定向进化中的有关问题 | 第19-20页 |
| ·定向进化中突变文库的构建方法 | 第20-28页 |
| ·定向进化的辅助方法 | 第28页 |
| ·突变库的质量 | 第28-29页 |
| ·突变基因表达系统的构建与选择 | 第29页 |
| ·突变基因文库的筛选 | 第29-31页 |
| ·定向进化的发展概况 | 第31-33页 |
| ·生物催化剂的组合改造 | 第33页 |
| ·定向进化的应用 | 第33-37页 |
| ·定向进化展望 | 第37-38页 |
| ·论文研究的目的意义与主要研究内容 | 第38-40页 |
| 第二章 D-泛解酸内酯水解酶cDNA 的克隆及序列分析 | 第40-58页 |
| ·材料与方法 | 第41-52页 |
| ·材料 | 第41-45页 |
| ·试验方法 | 第45-52页 |
| ·结果 | 第52-56页 |
| ·RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·反转录及PCR 扩增 | 第53页 |
| ·PCR 产物克隆 | 第53-54页 |
| ·cDNA 结构基因的扩增 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第三章 D-泛解酸内酯水解酶cDNA在大肠杆菌中的表达 | 第58-75页 |
| ·材料与方法 | 第59-68页 |
| ·材料 | 第59-61页 |
| ·试验方法 | 第61-68页 |
| ·结果 | 第68-73页 |
| ·表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第69-70页 |
| ·大肠杆菌分泌表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·分泌型表达载体的鉴定 | 第71页 |
| ·酶活测定 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-75页 |
| 第四章 D-泛解酸内酯水解酶cDNA在酿酒酵母中的表达 | 第75-84页 |
| ·材料与方法 | 第76-80页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·试验方法 | 第77-80页 |
| ·结果与讨论 | 第80-83页 |
| ·串珠镰孢霉D-泛解酸内酯水解酶cDNA结构基因酵母表达载体的构建 | 第80页 |
| ·表达载体pYX212-LAC的酶切鉴定 | 第80-82页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子的PCR 鉴定 | 第82-83页 |
| ·串珠镰孢霉D-泛解酸内酯水解酶cDNA 结构基因在酿酒酵母W303-1A 中的表达及重组子D-泛解酸内酯水解酶酶活测定 | 第83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 D-泛解酸内酯水解酶的定向进化 | 第84-108页 |
| ·材料与方法 | 第85-92页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·试验方法 | 第86-92页 |
| ·结果 | 第92-103页 |
| ·基因随机突变引入策略 | 第92-93页 |
| ·D-泛解酸内酯水解酶筛选模型的建立 | 第93-94页 |
| ·突变体的筛选 | 第94-97页 |
| ·突变体PCR 鉴定结果 | 第97页 |
| ·进化酶与野生型酶最适pH 的测定及酶活力对比 | 第97-99页 |
| ·进化酶与野生型酶pH 耐受性实验 | 第99页 |
| ·突变体菌株生长曲线的测定 | 第99-100页 |
| ·进化酶与野生型酶序列比较结果 | 第100-101页 |
| ·野生型D-泛解酸内酯水解酶与进化酶二级结构预测与对比 | 第101-103页 |
| ·讨论 | 第103-107页 |
| ·D-泛解酸内酯水解酶进化策略 | 第103-104页 |
| ·突变库的构建与筛选 | 第104-106页 |
| ·培养温度及诱导对突变体筛选的影响 | 第106-107页 |
| ·突变体酶活及pH 稳定性提高机理的初步探讨 | 第107页 |
| ·本章小结 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-117页 |
| 论文主要结论 | 第117-118页 |
| 论文的创新之处及理论和实际应用意义 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 博士在读期间已发表(含待发表)论文 | 第120-121页 |
| 论文创新点 | 第121-122页 |
| 附图 | 第122-126页 |
