| 第一章 文献综述 | 第1-39页 |
| ·RNA沉默--生物中普遍存在的表达监控机制 | 第8-23页 |
| ·RNA沉默的概况 | 第8页 |
| ·RNA沉默的过程 | 第8-9页 |
| ·RNA沉默的机理 | 第9-13页 |
| ·RNA沉默中的关键因子及相应作用 | 第13-18页 |
| ·RNA沉默的生物学意义及实际应用 | 第18-23页 |
| ·RNA监控机制(RNA surveillance) | 第23-25页 |
| ·RNA surveillance系统的定义及分类 | 第23页 |
| ·RNA surveillance系统的特点及过程特征 | 第23-25页 |
| ·RNA surveillance系统与正常mRNA降解有着不同的分子机制 | 第25页 |
| ·真核生物mRNA3＇非翻译区的组成及对基因表达的影响 | 第25-31页 |
| ·mRNA3＇-UTR内的末端加工信号 | 第26-28页 |
| ·mRNA3＇-UTR加工的复杂性 | 第28-29页 |
| ·mRNA3＇-UTR对基因表达的影响 | 第29-31页 |
| ·RNA沉默丰富了病毒与宿主植物之间的互作与共进化关系 | 第31-38页 |
| ·基因沉默--植物抵御外来病毒入侵的一种机制 | 第31-33页 |
| ·病毒对植物的反应 | 第33-38页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第39-57页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·宿主菌 | 第39页 |
| ·质粒载体 | 第39页 |
| ·各种酶及试剂 | 第39页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·病毒基因及侵染性克隆 | 第39-40页 |
| ·所用引物 | 第40页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第40-43页 |
| ·培养基配制 | 第40-41页 |
| ·常用溶液的配制 | 第41页 |
| ·实验所需试剂及其配制 | 第41-43页 |
| ·基本实验方法 | 第43-57页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第43页 |
| ·重组质粒的快速鉴定(Cracking) | 第43-44页 |
| ·碱裂解活少量提取质粒DNA | 第44页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒DNA | 第44页 |
| ·DNA片段的回收 | 第44-45页 |
| ·在质粒载体中进行DNA克隆 | 第45-46页 |
| ·Agro-infiltration方法接种本生烟 | 第46-47页 |
| ·植物组织基因组DNA的提取 | 第47页 |
| ·Southern杂交 | 第47-49页 |
| ·植物组织总RNA的提取 | 第49-50页 |
| ·低分子量RNA的提取 | 第50页 |
| ·Northern杂交 | 第50-53页 |
| ·RT-PCR-Southern | 第53-54页 |
| ·Westem Blot | 第54-55页 |
| ·本生烟(Ncotiana benthamiana)的遗传转化 | 第55页 |
| ·细胞核RNA与细胞质RNA的提取 | 第55页 |
| ·本生烟原生质体的电击转化 | 第55-56页 |
| ·植物基因沉默的观察记录 | 第56页 |
| ·转基因植株后代的Kan抗性筛选 | 第56页 |
| ·转基因植株的ELISA检测 | 第56-57页 |
| 第三章 异常mRNA表达在植物基因沉默中的作用 | 第57-65页 |
| ·载体的来源与结构 | 第58页 |
| ·注射侵染后表型的观察与统计 | 第58-59页 |
| ·表型变化后的分子检测 | 第59-62页 |
| ·Northern Blot | 第59-60页 |
| ·沉默植株中的siRNA检测 | 第60-61页 |
| ·接种本生烟体内正、负意GFP siRNA的积累情况检测 | 第61页 |
| ·接种本生烟中的GFP基因的甲基化分析 | 第61-62页 |
| ·沉默植株的嫁接试验 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 同源序列诱发系统性基因沉默的剂量效应 | 第65-73页 |
| ·供试的表达载体 | 第65-66页 |
| ·不同类型载体接种后诱发基因沉默的效率比较 | 第66-67页 |
| ·接种植株体内GFP mRNA的Northern blot检测 | 第67-68页 |
| ·接种植株内siRNA的检测 | 第68-69页 |
| ·接种植株基因组DNA甲基化的检测 | 第69页 |
| ·接种植株体内瞬时表达的GFP蛋白Western Blot检测 | 第69-70页 |
| ·通用表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 异常结构GFP基因表达产物的特性分析 | 第73-81页 |
| ·GFP基因异常表达载体对本生烟的馈传转化 | 第73-76页 |
| ·本生烟再生植株的获得 | 第73-74页 |
| ·再生植株的统计及长波紫外下的表型观察 | 第74页 |
| ·再生植株的分子检测 | 第74-76页 |
| ·GFP基因异常表达产物的特性分析 | 第76-79页 |
| ·转录物的结构形式 | 第76-77页 |
| ·转录物的细胞定位 | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 重复串联基因结构诱发的基因沉默与植物病毒抗性 | 第81-91页 |
| ·供试转基因烟草 | 第81-82页 |
| ·转基因纯合系的筛选鉴定 | 第82页 |
| ·Kan抗性的纯合系的筛选 | 第82页 |
| ·纯合表型株系的鉴定 | 第82页 |
| ·抗性植株的分子检测 | 第82-87页 |
| ·Northern检测表明了转化不同结构的植株GFP基因沉默的程度不同 | 第82-84页 |
| ·转基因烟草的Southrn Blot检测 | 第84-85页 |
| ·转基因植株中GFP基因的序列测定 | 第85-86页 |
| ·不同表型转基因植株的DNA甲基化检测 | 第86-87页 |
| ·GFP3转基因植株的嫁接试验 | 第87页 |
| ·GFP1和GFP3株系的抗病性测定 | 第87-90页 |
| ·T_1代植株的抗病性检测 | 第88-89页 |
| ·T_3代植株的抗病性检测 | 第89-90页 |
| ·结果与讨论 | 第90-91页 |
| 第七章 BNYVV和RBSDV编码基因沉默抑制子的初步研究 | 第91-103页 |
| ·嵌合载体的构建 | 第91-95页 |
| ·PVX载体ND108的改造构建 | 第92-93页 |
| ·表达外源病毒基因的PVX嵌合载体构建 | 第93-95页 |
| ·病毒基因嵌合载体接种本生烟后的症状表现与Northern检测 | 第95-96页 |
| ·BNYVV一14K和RBSDV-S6对本生烟16C基因沉默的抑制 | 第96-98页 |
| ·嵌合病毒载体对基因沉默的逆转作用 | 第96-97页 |
| ·对双元载体pinG引发基因沉默的抑制作用 | 第97-98页 |
| ·RBSDV不同基因组分对PVX症状及GFP瞬时表达的影响 | 第98-100页 |
| ·嵌合载体混合接种后的症状表现与病毒检测 | 第98-99页 |
| ·嵌合载体混合接种后GFP基因的瞬时表达情况 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-103页 |
| 参考文献 | 第103-123页 |
| 缩略词 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
