多形性胶质母细胞瘤增殖、侵袭相关基因的克隆和功能研究
| 中英文对照表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分 差异基因的克隆 | 第19-50页 |
| 实验材料 | 第19-20页 |
| 一、 组织来源 | 第19页 |
| 二、 生化试剂 | 第19-20页 |
| 三、 实验设备 | 第20页 |
| 实验步骤 | 第20-42页 |
| 一、 肿瘤标本RNA和mRNA的抽提 | 第20-23页 |
| ·取材 | 第20页 |
| ·实验器皿预处理 | 第20-21页 |
| ·组织总RNA的制备 | 第21页 |
| ·寡聚纤维素纯化mRNA | 第21-22页 |
| ·样品紫外分光检测及琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| 结果 | 第22-23页 |
| 二、 双链cDNA合成及酶切 | 第23-25页 |
| ·合成第一链 | 第23页 |
| ·合成第二链 | 第23-24页 |
| ·RsaI酶切 | 第24页 |
| ·鉴定酶切效果 | 第24-25页 |
| 结果 | 第25页 |
| 三、 双链cDNA的接头连接 | 第25-28页 |
| ·接头的连接 | 第25-26页 |
| ·检测连接效率 | 第26-28页 |
| 结果 | 第28页 |
| 四、 两次消减杂交 | 第28-30页 |
| ·第一次杂交 | 第28-29页 |
| ·第二次杂交 | 第29-30页 |
| 结果 | 第30页 |
| 五、 两次抑制性PCR | 第30-33页 |
| ·两次PCR | 第30-32页 |
| ·分析PCR消减效率 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33页 |
| 六、 cDNA消减文库的构建 | 第33-36页 |
| ·配制LB液体和固体培养基 | 第33-34页 |
| ·DNA重组 | 第34页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第34页 |
| ·转化 | 第34-35页 |
| ·质粒抽提 | 第35-36页 |
| ·双酶切 | 第36页 |
| 结果 | 第36页 |
| 七、 克隆鉴定分析 | 第36-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 第二部分 差异基因在不同级别胶质瘤中的定量分析 | 第50-69页 |
| 实验材料 | 第50-51页 |
| 一、 组织来源 | 第50页 |
| 二、 生化试剂 | 第50-51页 |
| 三、 实验设备 | 第51页 |
| 实验步骤 | 第51-61页 |
| 一、 肿瘤标本RNA和mRNA的抽提 | 第51-52页 |
| 二、 cDNA合成 | 第52-54页 |
| ·引物设计 | 第52-53页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第53-54页 |
| ·分光光度计对cDNA产物进行定性和定量检测 | 第54页 |
| 三、 优化PCR反应参数 | 第54-60页 |
| ·优化Mg~(2+)浓度 | 第54-55页 |
| ·优化循环参数 | 第55-56页 |
| 结果 | 第56-60页 |
| 四、 比较差异基因在不同级别胶质瘤中的表达差异 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 讨论 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 综述1 抑制性消减杂交 | 第71-80页 |
| 综述2 脑胶质瘤的基因变化 | 第80-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
