| 前言 | 第1-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-47页 |
| 1． 蛇毒类凝血酶的结构与功能 | 第16-31页 |
| 1．1 蛇毒类凝血酶来源 | 第16页 |
| 1．2 蛇毒类凝血酶的生物学性质 | 第16-26页 |
| 1．3 一级结构 | 第26-29页 |
| 1．4 二级结构 | 第29-31页 |
| 2． 蛇毒类凝血酶的基因工程研究 | 第31-35页 |
| 3． 蛇毒类凝血酶的分离纯化方法 | 第35-38页 |
| 3．1 离子交换柱层析 | 第35-36页 |
| 3．2 凝胶过滤柱层析 | 第36-37页 |
| 3．3 反相液相色谱 | 第37页 |
| 3．4 亲和层析 | 第37-38页 |
| 4． 小结 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-47页 |
| 第二章 两种蝮蛇毒类凝血酶基因的克隆和序列分析 | 第47-68页 |
| 中文摘要 | 第47-48页 |
| 引言 | 第48-49页 |
| 1． 实验材料和方法 | 第49-53页 |
| 1．1 大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶基因的获得 | 第49-53页 |
| 1． 2 长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶基因的获得 | 第53页 |
| 2． 结果与讨论 | 第53-64页 |
| 2．1 大连蛇岛腹蛇类凝血酶基因序列分析 | 第53-59页 |
| 2．2 同源性分析 | 第59-63页 |
| 2．3 两种蝮蛇毒类凝血酶的蛋白质一级结构比较 | 第63-64页 |
| 3． 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 第三章 两种蝮蛇类凝血酶基因在大肠杆菌中的克隆，融合表达及分离纯化 | 第68-89页 |
| 摘要 | 第68页 |
| 引言 | 第68-70页 |
| 1．实验材料和方法 | 第70-75页 |
| 1．1 材料 | 第70-71页 |
| 1．2 方法 | 第71-75页 |
| 1．2．1 基因的重组克隆技术 | 第71-74页 |
| 1．2．1．1 质粒pUC118+目的基因的构建 | 第71-74页 |
| 1．2．1．2 表达载体的构建 | 第74页 |
| 1．2．2 类凝血酶基因的表达 | 第74页 |
| 1．2．3 表达产物的纯化 | 第74-75页 |
| 1．2．4 SDS-PAGE | 第75页 |
| 2． 结果与讨论 | 第75-85页 |
| 2．1 亚克隆质粒PUC18载体+0．7kb目的基因的构建 | 第75-78页 |
| 2．2 表达载体的构建 | 第78-82页 |
| 2．3 重组类凝血酶的表达 | 第82-84页 |
| 2．4 重组类凝血酶的纯化 | 第84-85页 |
| 3． 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-89页 |
| 第四章 大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕氏酵母中的克隆与表达 | 第89-113页 |
| 摘要 | 第89页 |
| 引言 | 第89-91页 |
| 1． 实验材料和方法 | 第91-99页 |
| 1．1 材料 | 第91页 |
| 1．2 重组子的构建与多拷贝整合子的筛选 | 第91-98页 |
| 1．3 在摇瓶中表达重组蛋白 | 第98页 |
| 1．4 酶活性鉴定 | 第98-99页 |
| 1．5 蛋白质浓度测定 | 第99页 |
| 1．6 聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳 | 第99页 |
| 2． 结果与讨论 | 第99-109页 |
| 2．1 重组子的构建 | 第99-103页 |
| 2．2 多拷贝整合子的筛选 | 第103-104页 |
| 2．3 重组类凝血酶在摇瓶中获得表达 | 第104页 |
| 2．4 发酵条件的优化 | 第104-109页 |
| 3． 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-113页 |
| 第五章 大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶基因在毕氏酵母中表达产物的分离纯化与部分性质鉴定 | 第113-143页 |
| 摘要 | 第113-114页 |
| 引言 | 第114-115页 |
| 1． 实验材料和方法 | 第115-118页 |
| 1．1 材料 | 第115页 |
| 1．2 在摇瓶中表达重组蛋白 | 第115页 |
| 1．3 重组类凝血酶的分离纯化 | 第115-117页 |
| 1．4 生色底物活性酶活性鉴定 | 第117页 |
| 1．5 精氨酸酯酶的活性测定 | 第117页 |
| 1．6 蛋白质浓度测定 | 第117-118页 |
| 1．7 聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳 | 第118页 |
| 1．8 去糖基化 | 第118页 |
| 2． 结果与讨论 | 第118-138页 |
| 2．1 重组类凝血酶的分离 | 第118-121页 |
| 2．2 重组类凝血酶的纯化 | 第121-134页 |
| 2．3 重组类凝血酶的部分性质 | 第134-138页 |
| 3． 结论 | 第138-140页 |
| 参考文献 | 第140-143页 |
| 第六章 结论与展望 | 第143-149页 |
| 附录 | 第149-162页 |
| 发表论文 | 第162-164页 |
| 致谢 | 第164页 |
