| 缩写表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 植物转基因方法、存在问题及对策（文献综述） | 第9-32页 |
| 1 植物转基因方法概述 | 第9-21页 |
| 1．1 载体转化系统 | 第9-15页 |
| 1．1．1 根癌农杆菌Ti质粒介导的基因转化 | 第9-13页 |
| 1．1．2 发根农杆菌Ri质粒载体基因转化 | 第13页 |
| 1．1．3 植物病毒载体介导基因转化 | 第13-15页 |
| 1．2 种质转化系统 | 第15-17页 |
| 1．2．1 花粉管导入法 | 第15-16页 |
| 1．2．2 生殖细胞浸泡法 | 第16页 |
| 1．2．3 胚囊、子房注射法 | 第16-17页 |
| 1．3 直接转化系统 | 第17-20页 |
| 1．3．1 化学诱导DNA直接转化 | 第17-18页 |
| 1．3．2 物理法诱导DNA直接转化 | 第18-20页 |
| 1．4 植物基因转化系统的选择策略 | 第20-21页 |
| 1．4．1 基因转化系统的评价条件 | 第20-21页 |
| 1．4．2 植物基因转化系统的选择原则 | 第21页 |
| 2 植物遗传转化中出现的问题和对策 | 第21-32页 |
| 2．1 组织培养中的休细胞变异 | 第21-22页 |
| 2．2 转基因沉默 | 第22-29页 |
| 2．2．1 转基因沉默的机理 | 第23-27页 |
| 2．2．1．1 转录水平的基因沉默 | 第23-25页 |
| 2．2．1．2 转录后水平的基因沉默 | 第25-27页 |
| 2．2．2 克服转基因沉默的策略 | 第27-29页 |
| 2．2．2．1 密码子优化策略 | 第27-28页 |
| 2．2．2．2 MAR／SAR序列的利用 | 第28页 |
| 2．2．2．3 位点特异性整合 | 第28-29页 |
| 2．3 非目的片段的去除 | 第29-32页 |
| 2．3．1 共转化系统 | 第29-30页 |
| 2．3．2 位点特异性重组系统 | 第30页 |
| 2．3．3 多—自动转化系统 | 第30-32页 |
| 引言 | 第32-34页 |
| 材料与方法 | 第34-47页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| 1．1 植物材料 | 第34页 |
| 1．2 质粒和菌种 | 第34页 |
| 1．3 试剂 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-47页 |
| 2．1 番茄rbcS3A和rbcS3C基因启动子的扩增和序列鉴定 | 第35-37页 |
| 2．1．1 番茄基因组DNA的提取 | 第35页 |
| 2．1．2 PCR扩增 | 第35-37页 |
| 2．1．2．1 PCR引物设计与合成 | 第35-36页 |
| 2．1．2．2 PCR反应体系 | 第36-37页 |
| 2．1．3 序列测定 | 第37页 |
| 2．2 克隆载体和双元载体的构建 | 第37-39页 |
| 2．2．1 质粒DNA的碱裂解法小量提取 | 第37页 |
| 2．2．2 质粒DNA的碱裂解法大量提取 | 第37-38页 |
| 2．2．3 目的片断的回收 | 第38页 |
| 2．2．4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2．2．5 CaCl_2法转化大畅杆菌 | 第39页 |
| 2．3 rbcS3A-gusA和rbcS3C-gusA转基因植株的制备及鉴定 | 第39-46页 |
| 2．3．1 农杆菌的制备 | 第39-40页 |
| 2．3．1．1 农杆菌感受态的制备 | 第39-40页 |
| 2．3．1．2 农杆菌的转化 | 第40页 |
| 2．3．1．3 农杆菌的鉴定 | 第40页 |
| 2．3．2 转基因番茄的制备 | 第40-41页 |
| 2．3．3 转基因烟草的制备 | 第41页 |
| 2．3．4 转基因烟草的鉴定 | 第41-46页 |
| 2．3．4．1 GUS组织染色 | 第42页 |
| 2．3．4．2 Southern-blot | 第42-45页 |
| 2．2．4．3 T_0代转基因烟草种子的遗传分离规律分析 | 第45-46页 |
| 2．4 转基因悬浮系的建立 | 第46-47页 |
| 2．4．1 愈伤组织的诱导 | 第46页 |
| 2．4．2 愈伤组织状态的调整 | 第46页 |
| 2．4．3 愈伤组织细胞的摇培 | 第46页 |
| 2．4．4 悬浮细胞状态的调整 | 第46-47页 |
| 结果与分析 | 第47-67页 |
| 1 rbcS3A和rbcS3C启动子的扩增和序列测定 | 第47-49页 |
| 2 双元载体的构建及农杆菌转化 | 第49-51页 |
| 2．1 双元载体pBI—rbcS3A-gusA和pBI—rbcS3C-gusA的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| 2．2 双元载体转化农杆菌LBA4404 | 第50-51页 |
| 3 转pBI-rbcS3A-gusA和pBI-rbcS3C-gusA番茄的制备及鉴定 | 第51-60页 |
| 3．1 番茄的遗传转化 | 第51-60页 |
| 3．2 番茄转基因植株的鉴定——GUS组织染色 | 第60页 |
| 4 转pBI-rbcS3A-gusA和pBI-rbcS3C-gusA烟草的制备及鉴定 | 第60-66页 |
| 4．1 烟草的遗传转化 | 第60-62页 |
| 4．2 转基因烟草的鉴定 | 第62-66页 |
| 4．2．1 报告基同表达活性鉴定： | 第62-63页 |
| 4．2．2 转基因拷贝数鉴定 | 第63-64页 |
| 4．2．3 T_0代转基因烟草种子的遗传分离规律分析 | 第64-66页 |
| 5 转基因烟草悬浮系的建立 | 第66-67页 |
| 讨论 | 第67-71页 |
| 1． 载体构建及农杆菌转化 | 第67-68页 |
| 2． 番茄的遗传转化 | 第68页 |
| 3． 烟草的遗传转化和鉴定 | 第68-69页 |
| 4． 转基因烟草悬浮系的建立 | 第69页 |
| 5． 本实验的目的和意义 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 个人简历 | 第81页 |
