| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1 生长素结合蛋白ABP1 | 第12-20页 |
| ·ABP1在植物体内的分布 | 第12-13页 |
| ·ABP1的结构及性质 | 第13-15页 |
| ·ABP1的亚细胞定位 | 第15页 |
| ·ABP1基因 | 第15-16页 |
| ·ABP1 cDNA的研究 | 第16-17页 |
| ·ABP1在生长素信号转导中的作用 | 第17-20页 |
| 2 细胞核中的可溶性生长素结合蛋白SABP | 第20-21页 |
| 3 问题与展望 | 第21页 |
| 4 本研究的意义 | 第21-23页 |
| 第二章 苎麻生长素结合蛋白基因BNABP1CDNA克隆及序列分析 | 第23-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·酶与试剂盒 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-38页 |
| ·苎麻RNA的提取与检测 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR获得苎麻ABP1基因cDNA中间片段 | 第25-32页 |
| ·3′RACE获得cDNA 3′端序列 | 第32-34页 |
| ·5′RACE获得cDNA 5′端完整序列 | 第34-37页 |
| ·ABP1全序列的获得 | 第37-38页 |
| ·苎麻生长素结合蛋白基因(ABP1)序列的生物信息学分析 | 第38页 |
| 3 实验结果与分析 | 第38-51页 |
| ·苎麻总RNA提取 | 第38页 |
| ·BnABP1基因中间片段的克隆 | 第38-40页 |
| ·BnABP1基因3′端序列的克隆 | 第40-41页 |
| ·BnABP1基因5′端序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·BnABP1基因全序列的克隆 | 第42-43页 |
| ·序列分析 | 第43-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 第三章 BNABP1基因组织表达的半定量分析(SEMI-QUANTITATIVE RT-PCR) | 第52-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第52页 |
| ·酶与试剂 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-56页 |
| ·不同组织总RNA的提取 | 第52-53页 |
| ·苎麻cDNA第一链的合成 | 第53页 |
| ·半定量RT-PCR表达分析引物设计 | 第53页 |
| ·PCR反应条件优化 | 第53-55页 |
| ·不同组织BnABP1基因的扩增 | 第55-56页 |
| ·数据分析 | 第56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-62页 |
| ·不同组织RNA提取结果 | 第56-57页 |
| ·PCR扩增体系的优化 | 第57页 |
| ·反应条件优化结果 | 第57-61页 |
| ·苎麻BnABP1基因在不同组织表达定量的结果 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 BNABP1基因原核表达载体的构建及诱导表达 | 第64-74页 |
| 1 材料与试剂 | 第64-65页 |
| ·菌株与质粒 | 第64页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64-65页 |
| 2 实验方法 | 第65-70页 |
| ·引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第65-67页 |
| ·融合表达载体pET-32a-ABP1的构建及检测 | 第67-68页 |
| ·表达载体pET-32a-ABP1的转化 | 第68页 |
| ·表达载体pET-32a-ABP1在大肠杆菌中的诱导表达 | 第68-69页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第69-70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·表达载体pET-32a-ABP1的构建流程 | 第70-71页 |
| ·目的片段与pET-32a载体双酶切结果 | 第71页 |
| ·表达载体pET-32a-ABP1的菌落PCR及双酶切检测 | 第71-72页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 第五章 GFP绿色荧光蛋白融合表达载体的构建及对烟草的转化 | 第74-88页 |
| 1 材料与试剂 | 第74-76页 |
| ·菌株与质粒 | 第74页 |
| ·植物材料及培养基 | 第74-75页 |
| ·酶与试剂盒 | 第75页 |
| ·试剂 | 第75-76页 |
| 2 实验方法 | 第76-81页 |
| ·引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第76-77页 |
| ·GFP绿色荧光蛋白植物表达载体pCAMBIA1300-GFP-ABP1的构建及检测 | 第77-78页 |
| ·表达载体pCAMBIA1300-GFP-ABP1转化根癌农杆菌 | 第78-80页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第80-81页 |
| ·转基因烟草愈伤组织检测 | 第81页 |
| 3 结果与分析 | 第81-86页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1300-GFP-ABP1的构建流程 | 第81-82页 |
| ·目的片段与pCAMBIA1300-GFP载体双酶切结果 | 第82-83页 |
| ·表达载体pCAMBIA1300-GFP-ABP1的菌落PCR和酶切检测 | 第83-84页 |
| ·表达载体pCAMBIA1300-GFP-ABP1转化农杆菌LBA4404的检测 | 第84页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第84-85页 |
| ·转基因植株中BnABP1细胞定位情况检测结果 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 附录A:BNABP1基因中间片段测序报告 | 第94-95页 |
| 附录B:BNABP1基因3′RACE测序报告 | 第95-96页 |
| 附录C:BNABP1基因5′RACE测序报告 | 第96-97页 |
| 附录D:BNABP1基因全长测序报告 | 第97-98页 |
| 附录E:缩略词表 | 第98-99页 |
| 附录F:主要试剂配置 | 第99-103页 |
| 附录G:载体图谱 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
