| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写词表 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-24页 |
| ·研究背景 | 第9-12页 |
| ·棉花转基因目前存在的问题 | 第9-11页 |
| ·棉花叶绿体转化的可行性 | 第11-12页 |
| ·植物叶绿体转化概述 | 第12-21页 |
| ·叶绿体转基因技术的建立与发展 | 第13-14页 |
| ·叶绿体转化系统的原理、方法与特点 | 第14-17页 |
| ·叶绿体转基因技术的应用 | 第17-21页 |
| ·原核表达在植物基因研究中的应用 | 第21-22页 |
| ·本研究的意义和技术路线 | 第22-24页 |
| ·项目研究的意义和必要性 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 2 实验材料与方法 | 第24-34页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株、质粒及各种分子生物学试剂 | 第24页 |
| ·培养条件及其不同培养基配方 | 第24页 |
| ·缓冲液配方 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·棉花和烟草基因组的提取 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·载体构建 | 第27-29页 |
| ·载体检测 | 第29-30页 |
| ·原核表达(参照Novagen公司的pET system Manual) | 第30-31页 |
| ·基因枪转化棉花下胚轴及胚性、非胚性愈伤,烟草叶片 | 第31-33页 |
| ·转化材料的检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-52页 |
| ·棉花叶绿体同源片段,启动子(Prrn、PpsbA),终止子(Trps16、TpsbA)片段的克隆及序列分析 | 第34页 |
| ·叶绿体转化载体的构建 | 第34-44页 |
| ·同源片段的连接 | 第34-36页 |
| ·nptll基因表达盒的构建与连接 | 第36-39页 |
| ·gfp基因表达盒的构建与连接 | 第39-42页 |
| ·gfp基因表达盒、nptll基因表达盒与同源片段的连接 | 第42-44页 |
| ·叶绿体转化载体的原核表达分析 | 第44-47页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·诱导表达后gfp的检测 | 第46-47页 |
| ·基因枪转化烟草和棉花及转化烟草的筛选和再生 | 第47-50页 |
| ·棉花基因枪转化 | 第47-48页 |
| ·烟草基因枪转化 | 第48-50页 |
| ·转基因烟草叶片的gfp荧光检测及烟草叶片和棉花愈伤的PCR检测 | 第50-52页 |
| ·转基因烟草叶片的gfp荧光检测 | 第50-51页 |
| ·转基因烟草以及棉花愈伤的PCR检测 | 第51-52页 |
| 4.讨论 | 第52-56页 |
| ·叶绿体转化载体的构建中的问题 | 第52-53页 |
| ·叶绿体转化的方法 | 第53页 |
| ·叶绿体转基因的同质化 | 第53-55页 |
| ·叶绿体转基因植株的分子检测 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
