| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·抗虫基因研究进展 | 第10-11页 |
| ·Bt 基因 | 第10页 |
| ·蛋白酶抑制剂基因 | 第10-11页 |
| ·淀粉酶抑制剂基因 | 第11页 |
| ·外源凝集素基因 | 第11页 |
| ·植物凝集素基因研究进展 | 第11-17页 |
| ·凝集素的研究起源与定义 | 第12页 |
| ·凝集素的结构与功能 | 第12-13页 |
| ·凝集素抗虫机理 | 第13-15页 |
| ·植物凝集素转基因抗虫研究进展 | 第15-16页 |
| ·转凝集素基因植株抗蚜虫研究法 | 第16-17页 |
| ·水仙属植物凝集素研究进展 | 第17页 |
| ·立题依据 | 第17-18页 |
| ·研究方法与技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-32页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·植物材料与菌株 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·抗生素、培养基与缓冲液配方 | 第20-21页 |
| ·中国水仙凝集素基因的克隆 | 第21-26页 |
| ·RNA 提取与质量检测 | 第21-22页 |
| ·cDNA 第一链的反转录合成 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·PCR 反应体系 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物回收 | 第23页 |
| ·PCR 产物与pGEM-Teasy 载体的连接 | 第23页 |
| ·连接产物的纯化与电击转化 | 第23-24页 |
| ·质粒DNA 的小量制备 | 第24-25页 |
| ·质粒酶切与电泳检测 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·cDNA 序列测定与分析 | 第26页 |
| ·中国水仙凝集素基因的原核表达 | 第26-28页 |
| ·原核表达载体构建 | 第26页 |
| ·目的蛋白经IPTG 诱导表达 | 第26-27页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE 电泳检测 | 第27-28页 |
| ·包涵体检验 | 第28页 |
| ·植物表达载体构建及转化拟南芥与烟草 | 第28-32页 |
| ·植物表达载体构建 | 第28-29页 |
| ·侵染液的准备及转化拟南芥 | 第29-30页 |
| ·侵染液的准备及转化烟草 | 第30页 |
| ·烟草与拟南芥基因组DNA 提取 | 第30-31页 |
| ·转基因植株的筛选鉴定 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-44页 |
| ·中国水仙凝集素基因的克隆及性质分析 | 第32-36页 |
| ·中国水仙凝集素基因的克隆 | 第32页 |
| ·石蒜科凝集素氨基酸系统进化树比较 | 第32-35页 |
| ·几种凝集素二级结构比较 | 第35页 |
| ·几种凝集素三级结构比较 | 第35-36页 |
| ·NTL1 在不同部位的组织特异性表达 | 第36-37页 |
| ·NTL1 基因的原核表达 | 第37-42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·NTL1 成熟蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第38页 |
| ·不同诱导时间对表达效果的影响 | 第38-39页 |
| ·加入2%的葡萄糖对本底表达的抑制效果 | 第39页 |
| ·4℃过夜处理对表达的影响 | 第39-41页 |
| ·重组pET-NTL1-mature 包涵体的检测 | 第41-42页 |
| ·NTL1 转化烟草及拟南芥 | 第42-44页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第42页 |
| ·NTL1 基因转化烟草及转基因植株PCR 检测 | 第42-43页 |
| ·NTL1 基因转化拟南芥及转基因植株PCR 检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-50页 |
| ·NTL1 基因的克隆与序列分析 | 第44-45页 |
| ·NTL1 与典型的MBL 高度相似 | 第44页 |
| ·NTL1 作为抗虫候选基因的优势 | 第44-45页 |
| ·NTL1 表达模式分析 | 第45页 |
| ·NTL1 基因转入烟草与拟南芥 | 第45-47页 |
| ·NTL1 基因可使拟南芥花期提前 | 第46页 |
| ·适于拟南芥抗虫实验的培养条件 | 第46页 |
| ·转基因抗虫作物的潜在风险与控制 | 第46-47页 |
| ·pET-NTL1-mature 原核表达效果 | 第47-49页 |
| ·4℃过夜对表达效果的影响 | 第47页 |
| ·IPTG 的双重作用 | 第47-48页 |
| ·本底表达的消除与利用 | 第48页 |
| ·包涵体对蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| ·研究展望 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 图版 | 第56-59页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |