| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-26页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的简介 | 第11-24页 |
| ·历史回顾 | 第11页 |
| ·病原学特点 | 第11-12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·发病机制 | 第13-14页 |
| ·分子生物学特征 | 第14-18页 |
| ·疫苗研究进展 | 第18-22页 |
| ·诊断方法的研究进展 | 第22-24页 |
| ·研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·细胞与病毒 | 第26页 |
| ·实验动物、菌株与载体 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·病毒RNA的提取及反转录 | 第30页 |
| ·PCR反应扩增目的基因 | 第30页 |
| ·PCR产物回收和纯化 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31页 |
| ·PCR产物连接pMD 18T-Vector及重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒pET-H-Nsp2在大肠杆菌中的诱导表达 | 第32页 |
| ·融合蛋白的小量纯化 | 第32页 |
| ·纯化蛋白的Western blot分析 | 第32-33页 |
| ·实验动物的免疫 | 第33页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第34-36页 |
| ·单克隆抗体及杂交瘤细胞的特性鉴定 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-47页 |
| ·Nsp2蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定 | 第38-41页 |
| ·HuN4截短Nsp2基因的RT-PCR扩增的结果 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| ·重组HuN4 Nsp2的纯化 | 第39-40页 |
| ·Western blot分析 | 第40-41页 |
| ·细胞融合与筛选结果 | 第41-47页 |
| ·动物免疫 | 第41页 |
| ·ELISA筛选方法的建立 | 第41-42页 |
| ·细胞融合及阳性杂交瘤的筛选 | 第42-43页 |
| ·单抗的效价测定 | 第43页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定结果 | 第43页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第43-44页 |
| ·间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的特异性结果 | 第44页 |
| ·单克隆抗体的生物学活性鉴定 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性测定 | 第45页 |
| ·染色体计数 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·重组蛋白原核表达 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体制备过程中一些重要环节 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录:克隆的Nsp2基因与Genbank下载的PRRS(HuN4)基因进行序列比较 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第61页 |
