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牛支原体PCR检测方法的建立及临床应用

摘要第1-10页
Abstract第10-12页
引言第12-14页
第一章 奶牛支原体病的研究概况第14-26页
 1. 支原体病原学特征第14-17页
   ·形态和结构第14-15页
   ·生长要求和培养特性第15页
   ·生化特征第15-16页
   ·抵抗力第16页
   ·致病性第16页
   ·抗原结构和免疫性第16-17页
   ·支原体诊断方法第17页
     ·分离培养第17页
     ·补体结合试验第17页
     ·免疫荧光技术检验第17页
 2. 牛的致病支原体第17-19页
   ·丝状支原体丝状亚种第17-18页
   ·牛支原体第18页
   ·牛生殖道支原体第18页
   ·无乳支原体第18页
   ·山羊支原体第18页
   ·结膜支原体第18页
   ·绵羊肺炎支原体第18-19页
 3. 牛肺炎支原体病第19-22页
   ·诊断第19-20页
     ·流行病学第19页
     ·临床症状第19-20页
     ·病理学变化第20页
     ·病原分离鉴定第20页
     ·血清学诊断方法第20页
   ·治疗第20-22页
   ·防控措施第22页
     ·加强检疫监管第22页
     ·严格封锁隔离第22页
     ·加强消毒灭源第22页
     ·扑杀处理重症病牛第22页
     ·加强饲养管理第22页
 4. 国内外研究基本概况第22-26页
第二章 试验部分第26-47页
 试验一 奶牛支原体病流行病学调查第26-30页
  1 流行病学第26页
  2 主要临床症状第26-27页
  3 病理变化第27页
  4 治疗情况第27-28页
  5 结果与讨论第28-30页
 试验二 病料中病原支原体的培养第30-33页
  1 材料与方法第30-32页
   ·材料第30-31页
     ·病例第30页
     ·病料第30页
     ·支原体琼脂培养基第30页
     ·支原体肉汤培养基第30-31页
   ·方法第31页
     ·病原的分离培养第31页
     ·培养物的鉴定和再处理第31页
     ·涂片镜检第31页
   ·试验结果第31-32页
     ·病原的分离培养第31-32页
     ·镜检结果第32页
  3. 讨论第32-33页
 试验三 牛源支原体16S rRNA 的扩增和序列分析第33-38页
  1 材料与方法第33-34页
   ·材料第33页
     ·试验样品第33页
   ·方法第33-34页
     ·支原体模板提取方法第33-34页
     ·16S rRNA 基因的 PCR 扩增第34页
       ·引物设计第34页
       ·支原体16S rRNA 基因的扩增第34页
       ·支原体16S rRNA 基因的克隆、测序及系统发育分析第34页
  2 结果第34-37页
   ·支原体16S rRNA 基因 PCR 扩增及双酶切结果第34-35页
   ·测序结果与GenBank 中相应细菌的16S rRNA 基因比较第35-36页
   ·菌株16S rRNA 基因系统发育树的建立第36-37页
  3 讨论第37-38页
 试验四 牛源支原体多重PCR特异检测方法的建立及初步应用第38-47页
  1 材料与方法第38-40页
   ·支原体菌株第38页
   ·引物合成与设计第38-39页
   ·支原体模板的提取第39页
   ·PCR扩增和最佳反应条件的测定第39-40页
   ·敏感性和特异性测定第40页
   ·多重PCR的初步应用第40页
  2 结果第40-43页
   ·最佳反应条件的测定第40-41页
     ·PCR 引物及dNTP浓度测定第40-41页
     ·最佳退火温度和最佳循环次数的测定第41页
   ·敏感性的测定第41-42页
   ·特异性测定和已知样品检测结果第42-43页
   ·临床样品的检测结果第43页
  3 讨论第43-46页
  4 结论第46-47页
参考文献第47-51页
致谢第51-52页
攻读硕士学位期间发表的论文第52页

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