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番茄农杆菌介导基因转化技术体系的优化与番茄LeJA2基因的功能研究

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-13页
1 前言第13-31页
   ·番茄系统创伤信号因子研究进展第13-14页
   ·植物伤害信号途径第14-21页
     ·伤害信号的种类第15-16页
       ·系统素(systemin)第15页
       ·物理信号第15页
       ·活性氧第15页
       ·一氧化氮(NO)第15-16页
       ·寡聚半乳糖醛酸第16页
     ·伤害反应中的植物激素第16-18页
       ·茉莉酸(Jasmonic acid, JA)第16-17页
       ·乙烯(ethylene,ET)第17页
       ·水杨酸(salicylic acid,SA)第17页
       ·脱落酸(abscisic acid,ABA)第17页
       ·生长素(Auxin)第17-18页
     ·伤害诱导的细胞内变化第18-21页
       ·伤害和离子浓度的改变第18页
       ·伤害诱导磷脂酶活性变化第18-19页
       ·伤害引起CaM m RNA 积累第19页
       ·伤害诱导蛋白磷酸化与去磷酸化活性变化第19-20页
         ·CDPK第19-20页
         ·MAPK第20页
       ·蛋白磷酸酶第20-21页
     ·伤害诱导的防御基因第21页
     ·伤害诱导信号传导模式第21页
   ·茉莉酸抗性反应系统的研究第21-27页
     ·茉莉酸的研究第22-23页
     ·植物内源茉莉酸类化合物合成途径第23-25页
     ·番茄中信号传导途径的研究第25-27页
   ·番茄茉莉酸代谢相关基因克隆及功能分析第27-30页
   ·本课题研究的目的意义第30-31页
2 材料和方法第31-41页
   ·实验材料第31-32页
     ·植物材料第31页
     ·菌株第31页
     ·质粒第31-32页
     ·主要试剂第32页
     ·主要仪器第32页
     ·PCR 扩增引物第32页
   ·主要试剂第32-35页
     ·培养基的配制第32-33页
       ·细菌培养基第32-33页
       ·植物培养基第33页
     ·常用的缓冲液和试剂成分的配制第33-35页
       ·质粒DNA 提取及纯化所用的试剂第33页
       ·DNA 提取所用的试剂第33页
       ·电泳所用的试剂第33-34页
       ·PPO 活性检测所用的试剂第34页
       ·PPO 活力测定所用的试剂第34页
       ·其他试剂第34-35页
   ·实验方法第35-40页
     ·番茄遗传转化体系的优化第35页
       ·试验采取的处理和水平第35页
     ·SDS 碱裂解法少量快速制备质粒DNA第35-36页
       ·质粒检测第36页
     ·番茄遗传转化第36-38页
       ·种植无菌苗第36页
       ·外植体的准备第36-37页
       ·农杆菌介导的转化第37页
       ·抗性愈伤筛选第37-38页
       ·抗性芽的生根第38页
     ·转基因植株的分子检测第38-40页
       ·番茄基因组DNA 的提取参考Li et al.(2006)所描述第38-39页
       ·PCR 扩增分析第39-40页
     ·两种类型转基因苗的性状鉴定第40页
     ·转基因植株多酚氧化酶PPO 活性的测定第40页
       ·试验方法第40页
       ·实验设计第40页
   ·计算公式第40-41页
3 实验结果与分析第41-53页
   ·质粒检测第41页
   ·番茄遗传转化体系的优化第41-46页
     ·番茄转基因植株的获得第43-46页
     ·番茄基因转化结果第46页
   ·转基因番茄植株的分子生物学鉴定第46-48页
   ·T0 代转基因苗的性状观测第48-50页
   ·转基因植株多酚氧化酶(PPO)活性检测第50-53页
4 讨论第53-57页
   ·番茄农杆菌介导体系的优化第53-54页
     ·组织培养过程中注意事项第53-54页
   ·转基因植株的PPO 活性测定第54-55页
   ·LeJA2 基因的BLAST 同源序列分析第55-57页
5 结论第57-59页
   ·番茄转化系统的优化第57页
   ·番茄基因转化结果第57页
   ·LeJA2 基因功能分析第57-59页
参考文献第59-73页
附录1:常用培养基配方第73-75页
附录2 LeJA2 基因用于转基因的片段第75-78页
附录3第78-79页
致谢第79-80页

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