| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1.1 雄性生殖系统概述 | 第13-19页 |
| 1.1.1 雄性生殖系统的组成与结构 | 第13页 |
| 1.1.2 睾丸的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.3 睾丸中配子的产生和激素的调节 | 第14-19页 |
| 1.2 支持细胞的结构与生理功能 | 第19-25页 |
| 1.2.1 支持细胞的结构 | 第19-22页 |
| 1.2.2 支持细胞的功能 | 第22页 |
| 1.2.3 支持细胞所表达基因的功能 | 第22-23页 |
| 1.2.4 FSH对支持细胞的调控 | 第23-25页 |
| 1.3 SPATA2基因的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.3.1 早期的SPATA2基因相关研究 | 第25-26页 |
| 1.3.2 近期关于SPATA2蛋白结构与功能的研究 | 第26-28页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第30页 |
| 2.1.2 Cas9质粒 | 第30页 |
| 2.1.3 抗体 | 第30-31页 |
| 2.1.4 引物 | 第31-32页 |
| 2.2 主要仪器和设备 | 第32页 |
| 2.3 主要试剂和溶液 | 第32-39页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第33-35页 |
| 2.3.2 溶液配制 | 第35-39页 |
| 2.4 实验方法 | 第39-51页 |
| 2.4.1 总RNA提取 | 第39页 |
| 2.4.2 反转录 | 第39-40页 |
| 2.4.3 普通RT-PCR | 第40页 |
| 2.4.4 real-time PCR | 第40-41页 |
| 2.4.5 免疫组织化学 | 第41-42页 |
| 2.4.6 免疫荧光 | 第42-43页 |
| 2.4.7 HE染色 | 第43页 |
| 2.4.8 Western blot | 第43-45页 |
| 2.4.9 基因敲除小鼠模型的构建 | 第45-48页 |
| 2.4.10 DNA的提取及基因型鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4.11 精子活力测定 | 第49页 |
| 2.4.12 精子形态染色 | 第49页 |
| 2.4.13 精子计数 | 第49-50页 |
| 2.4.14 间质细胞的分离 | 第50页 |
| 2.4.15 体内受精试验 | 第50页 |
| 2.4.16 配种试验 | 第50-51页 |
| 2.5 数据处理 | 第51-52页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第52-83页 |
| 3.1 SPATA2的表达与定位 | 第52-55页 |
| 3.1.1 SPATA2在小鼠不同组织中的表达定量 | 第52页 |
| 3.1.2 SPATA2在出生后不同时期的小鼠睾丸中的表达定量 | 第52-53页 |
| 3.1.3 SPATA2在睾丸组织中的免疫荧光定位 | 第53-54页 |
| 3.1.4 SPATA2在不同时期的睾丸曲细精管上皮中的免疫组化定位 | 第54-55页 |
| 3.2 SPATA2敲除小鼠模型的构建 | 第55-58页 |
| 3.2.1 CRISPR/Cas9n靶点的设计 | 第55页 |
| 3.2.2 敲除小鼠的产生 | 第55-56页 |
| 3.2.3 敲除动物的繁育与鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.4 敲除效率的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3 SPATA2敲除动物的表型分析 | 第58-66页 |
| 3.3.1 SPATA2敲除小鼠雄性生殖器官的重量及大小分析 | 第59-60页 |
| 3.3.2 SPATA2敲除小鼠睾丸的组织形态学分析 | 第60-62页 |
| 3.3.3 SPATA2敲除小鼠的精子数量统计 | 第62-63页 |
| 3.3.4 SPATA2敲除小鼠的附睾的组织学分析 | 第63-64页 |
| 3.3.5 SPATA2敲除小鼠的精子活力测定 | 第64-65页 |
| 3.3.6 SPATA2敲除小鼠的精子形态分析 | 第65-66页 |
| 3.4 敲除SPATA2对雄性小鼠生殖能力的影响 | 第66-67页 |
| 3.4.1 配种试验 | 第66页 |
| 3.4.2 体内受精试验 | 第66-67页 |
| 3.5 敲除SPATA2对睾丸支持细胞和生殖细胞的影响 | 第67-75页 |
| 3.5.1 SPATA2对睾丸中细胞增殖的影响 | 第67-68页 |
| 3.5.2 SPATA2对睾丸中细胞凋亡的影响 | 第68-69页 |
| 3.5.3 SPATA2对曲细精管中生殖细胞总数的影响 | 第69页 |
| 3.5.4 SPATA2对精原细胞与精母细胞数量的影响 | 第69-72页 |
| 3.5.5 SPATA2对睾丸支持细胞数量的影响 | 第72-74页 |
| 3.5.6 SPATA2对睾丸血睾屏障功能的影响 | 第74-75页 |
| 3.6 敲除SPATA2导致雄性生殖能力减弱的相关机理研究 | 第75-79页 |
| 3.6.1 SPATA2对睾丸支持细胞常见基因表达的影响 | 第75-77页 |
| 3.6.2 SPATA2敲除小鼠的垂体中FSH表达的变化 | 第77-79页 |
| 3.7 结果分析与讨论 | 第79-83页 |
| 第四章 结论与展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 附录 | 第96-97页 |
| 作者简历 | 第97页 |
