ANS基因转化芥菜型油菜的研究及DFR基因表达载体的构建
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| 1 ANS、DFR基因研究进展 | 第9-12页 |
| ·ANS基因的研究现状 | 第9-10页 |
| ·DFR基因的作用机制及分离 | 第10-11页 |
| ·DFR的转基因 | 第11-12页 |
| ·芥菜型油菜DFR基因的研究 | 第12页 |
| 2 油菜农杆菌介导遗传转化体系研究进展 | 第12-17页 |
| ·高频再生转化体系构建的影响因素 | 第12-15页 |
| ·外植体 | 第13页 |
| ·基因型 | 第13页 |
| ·激素 | 第13-14页 |
| ·AgNO_3 | 第14-15页 |
| ·农杆菌介导的floral-dip转化体系 | 第15-17页 |
| ·方法的提出和发展 | 第15-16页 |
| ·转化条件 | 第16-17页 |
| ·存在问题及展望 | 第17页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 芥菜型油菜再生转化体系的优化 | 第18-26页 |
| 1 试验材料与试剂 | 第18页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·主要化学试剂、仪器设备 | 第18页 |
| ·细菌培养基:YEP | 第18页 |
| 2 方法与步骤 | 第18-20页 |
| ·外植体的准备 | 第18-19页 |
| ·种子灭菌 | 第18-19页 |
| ·无菌苗的培养 | 第19页 |
| ·外植体的获取 | 第19页 |
| ·根癌农杆菌工作液的准备 | 第19页 |
| ·农杆菌感染时间长短的试验 | 第19页 |
| ·预培养基中激素配比实验 | 第19页 |
| ·分化培养基中激素配比实验 | 第19-20页 |
| ·PPT浓度的筛选 | 第20页 |
| ·PPT的浓度对种子萌发及幼苗生长的影响 | 第20页 |
| 3 结果分析 | 第20-24页 |
| ·感染时间对油菜子叶柄分化频率的影响 | 第20页 |
| ·预培养基中不同激素配比对外植体生长的影响 | 第20-21页 |
| ·分化培养基中不同激素配比对外植体生长的影响 | 第21-23页 |
| ·PPT浓度筛选 | 第23页 |
| ·PPT的浓度对种子萌发及幼苗生长的影响 | 第23-24页 |
| ·PPT对种子萌发的影响 | 第24页 |
| ·PPT对幼苗生长的影响 | 第24页 |
| 4 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 ANS基因在芥菜型油菜中的转化 | 第26-31页 |
| 1 材料 | 第26页 |
| ·供试品种 | 第26页 |
| ·菌株和载体 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| 2 芥菜型油菜的遗传转化方法 | 第26-27页 |
| 3 转基因油菜的检测 | 第27-28页 |
| ·提取DNA | 第27页 |
| ·PCR检测 | 第27-28页 |
| ·种子的PPT发芽测试 | 第28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-29页 |
| ·抗性苗的PCR检测 | 第28-29页 |
| ·抗性苗的表型观察 | 第29页 |
| ·PPT发芽试验的结果 | 第29页 |
| 5 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 DFR基因表达载体的构建 | 第31-39页 |
| 1 材料与方法 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·供试品种 | 第31页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·载体与质粒 | 第31页 |
| ·分子生物学试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31-35页 |
| ·油菜总RNA制备 | 第31-32页 |
| ·cDNA的合成 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增DFR基因片段 | 第33页 |
| ·PCR产物回收 | 第33页 |
| ·将回收产物转入T载体 | 第33页 |
| ·将目的DNA转入表达载体 | 第33-34页 |
| ·工程菌转化 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-37页 |
| ·DFR基因转入T-载体的酶切结果 | 第35-36页 |
| ·表达载体的酶切验证结果 | 第36-37页 |
| ·转化农杆菌质粒PCR检测结果 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 小结 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 缩写表(Abbreviation) | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 作者简历 | 第47页 |
