| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-22页 |
| ·关于临床药物索利夫定事件的思考 | 第14-15页 |
| ·事件回顾 | 第14页 |
| ·药物不良反应 | 第14-15页 |
| ·新药研发应重视药物相互作用 | 第15页 |
| ·代谢途径上的药物相互作用 | 第15-17页 |
| ·个体以及遗传基因与代谢 | 第17-19页 |
| ·代谢表型分类 | 第18页 |
| ·人种的基因差异导致代谢差异 | 第18-19页 |
| ·药物的代谢 | 第19-21页 |
| ·药物代谢经历的反应 | 第19页 |
| ·细胞色素P450对药物的羟化 | 第19-20页 |
| ·药物代谢物的毒性 | 第20页 |
| ·目前对代谢物研究的难点 | 第20-21页 |
| ·解决上述问题的构想 | 第21-22页 |
| 第2章 细胞色素P450基因及CYP3A型 | 第22-33页 |
| ·细胞色素P450介绍 | 第22-26页 |
| ·发现及命名 | 第22-23页 |
| ·分布及分型 | 第23-24页 |
| ·CYP450对药物的催化 | 第24-26页 |
| ·CYP3A亚家族研究进展 | 第26-28页 |
| ·成员组成和常见底物 | 第26-27页 |
| ·CYP3A4/5介绍 | 第27-28页 |
| ·外源物对CYP3A的调节 | 第28-29页 |
| ·CYP3A5的特点及功能 | 第29-30页 |
| ·CYP3A5申请专利 | 第30页 |
| ·异源基因表达系统 | 第30-32页 |
| ·目前用于表达CYP450s的系统 | 第30-31页 |
| ·斯德毕赤酵母表达系统 | 第31-32页 |
| ·技术路线 | 第32-33页 |
| 第3章 毕赤酵母表达载体的构建 | 第33-51页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·毕赤酵母常用表达菌株和载体 | 第33-34页 |
| ·实验材料 | 第34-38页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第34-35页 |
| ·实验菌种和质粒 | 第35-36页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第36-38页 |
| ·实验原理和内容 | 第38-46页 |
| ·目的基因同源整合酵母基因组的原理 | 第38-40页 |
| ·重组质粒CYP3A5-Ppic3.5k的构建与扩增 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的线性化及回收 | 第41-42页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·电转化毕赤酵母感受态 | 第43-44页 |
| ·MD初步筛选转化子 | 第44页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第44-45页 |
| ·PCR筛选重组转化子 | 第45-46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-50页 |
| ·重组质粒CYP3A5-Ppic3.5k的测序结果 | 第46-47页 |
| ·感受态制备 | 第47-48页 |
| ·乙醇沉淀回收线性化基因 | 第48页 |
| ·电转结果 | 第48页 |
| ·MD平板菌落生长情况 | 第48-49页 |
| ·酵母基因组提取结果 | 第49-50页 |
| ·阳性菌株PCR结果 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第4章 CYP3A5在毕赤酵母中表达 | 第51-61页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-55页 |
| ·实验仪器和试剂材料 | 第51-52页 |
| ·菌种和质粒 | 第52页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第52-55页 |
| ·实验原理和内容 | 第55-59页 |
| ·诱导重组酵母菌表达 | 第55-56页 |
| ·超声破碎菌体 | 第56页 |
| ·三氯乙酸(TCA)法浓缩上清 | 第56-57页 |
| ·常规SDS-PAGE电泳 | 第57-58页 |
| ·蛋白印迹Western Blot | 第58-59页 |
| ·实验结果与讨论 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE结果 | 第59-60页 |
| ·Western Blot结果 | 第60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第5章 酶的体外代谢验证 | 第61-70页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·实验仪器和试剂材料 | 第61页 |
| ·菌种 | 第61-62页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第62-63页 |
| ·实验原理和过程 | 第63-67页 |
| ·P450酶催化底物原理 | 第63-64页 |
| ·阳性菌株大量表达 | 第64页 |
| ·酵母微粒体的获得 | 第64-65页 |
| ·测定微粒体总蛋白浓度 | 第65页 |
| ·酶的体外代谢测试 | 第65-67页 |
| ·实验结果讨论 | 第67-69页 |
| ·酵母微粒体获得 | 第67页 |
| ·微粒体总蛋白浓度测定 | 第67-68页 |
| ·代谢产物的检测 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第6章 结论 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第70页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录 重组质粒CYP3A5-Ppic3.5k的测序结果 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
