| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 目录 | 第13-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-31页 |
| 1 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP) | 第18-20页 |
| ·BMP家族的种类和结构 | 第18页 |
| ·BMP-2的基因结构 | 第18-19页 |
| ·BMP的信号通路 | 第19-20页 |
| 2 BMP-2的生理作用 | 第20-23页 |
| ·BMP-2在骨形成中的作用 | 第20-21页 |
| ·BMP-2在肿瘤中的作用 | 第21-23页 |
| 3 乳腺癌 | 第23-31页 |
| ·雌激素与乳腺癌 | 第24-29页 |
| ·雌激素受体与乳腺癌 | 第29-31页 |
| 4 研究目的、意义及创新点 | 第31页 |
| ·研究目的和意义 | 第31页 |
| ·本研究的创新点 | 第31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-38页 |
| 1 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2 材料 | 第33-38页 |
| ·细胞株及实验动物 | 第33页 |
| ·菌株及质粒 | 第33页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第33页 |
| ·常用试剂 | 第33-35页 |
| ·试剂配方 | 第35-38页 |
| 第三章 rhBMP-2的鉴定 | 第38-51页 |
| 1 前言 | 第38-40页 |
| ·BMP-2的理化性质 | 第38页 |
| ·BMP-2的蛋白质结构 | 第38-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-42页 |
| ·SD-PAGE | 第40页 |
| ·HPLC反相色谱检测rhBMP-2自制样品与.rhBMP-2标准品 | 第40-41页 |
| ·串联飞行时间质谱鉴定蛋白分子量及纯度 | 第41页 |
| ·rhBMP-2诱导后C2C12细胞碱性磷酸酶(ALP)的生化检测 | 第41页 |
| ·钙钻法染色检测rhBMP-2诱导后C2C12细胞碱性磷酸酶的表达 | 第41-42页 |
| ·茜素红染色检测rhBMP-2诱导后C2C12细胞碱性磷酸酶的表达 | 第42页 |
| ·在体试验小鼠后肢肌袋异位骨形成实验 | 第42页 |
| ·新西兰兔桡骨大尺度骨缺损修复实验:rhBMP-2与冠昊公司材料的复合 | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-50页 |
| ·SDS-PAGE检测复性后rhBMP-2纯度 | 第42-43页 |
| ·HPLC反相色谱检测rhBMP-2自制样品与rhBMP-2标准品 | 第43-44页 |
| ·基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱(MALDI-TOF)测定rhBMP-2的纯度 | 第44页 |
| ·rhBMP-2诱导后C2C12细胞碱性磷酸酶(ALP)的生化检测 | 第44-45页 |
| ·钙钴法染色检测rhBMP-2诱导后C2C12细胞碱性磷酸酶的表达 | 第45-46页 |
| ·茜素红染色检测rhBMP-2诱导后C2C12细胞碱性磷酸酶的表达 | 第46-47页 |
| ·在体试验小鼠后肢肌袋异位骨形成实验 | 第47-48页 |
| ·新西兰兔桡骨大尺度骨缺损修复实验:rhBMP-2与冠昊公司材料的复合 | 第48-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 rhBMP-2对乳腺癌具有抑制其增殖的作用 | 第51-71页 |
| 1 前言 | 第51-52页 |
| ·BMP-2对肿瘤细胞的细胞周期具有抑制作用 | 第51页 |
| ·BMP-2对肿瘤细胞的细胞周期具有抑制作用 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-59页 |
| ·从MDA-MB-231细胞及MCF-7细胞中提取总RNA | 第52-53页 |
| ·逆转录 | 第53页 |
| ·实时荧光定量PCR法检测BMPR1A,BMPR1B,BMPR2,SAMD4,P21,Caspase,ERα-36,ERβ基因在MCF-7和MDA-MB-231细胞的表达 | 第53-54页 |
| ·免疫印迹检测p-smad,smad,ERα-36,ERβ在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达 | 第54-56页 |
| ·MTT法检测rhBMP-2对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用 | 第56页 |
| ·MTT法检测rhBMP-2,E2,tamoxifen对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的作用 | 第56页 |
| ·流式细胞仪分析rhBMP-2对MCF-7和MDA-MB-231细胞周期的影响 | 第56-57页 |
| ·流式细胞仪分析rhBMP-2对MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| ·研究rhBMP-2对Balb/c(nu/nu)裸鼠乳腺癌MDA-MB-231细胞移植瘤成瘤的抑制作用 | 第58页 |
| ·研究rhBMP-2对Balb/c(nu/nu)裸鼠乳腺癌MCF-7细胞移植瘤的抑制作用 | 第58-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-70页 |
| ·mRNA水平检测BMP-2信号通路的内源表达 | 第59-62页 |
| ·蛋白水平检测rhBMP-2对乳腺癌细胞BMP信号通路的激活 | 第62页 |
| ·BMP-2对乳腺癌细胞增殖的抑制 | 第62-64页 |
| ·BMP-2对细胞周期的影响 | 第64-66页 |
| ·BMP-2对乳腺癌细胞凋亡的促进作用 | 第66-67页 |
| ·在体水平研究BMP-2对Balb/c(nu/nu)裸鼠乳腺癌MDA-MB-231细胞移植瘤成瘤的抑制作用 | 第67-68页 |
| ·在体水平研究BMP-2对Balb/c(nu/nu)裸鼠乳腺癌MCF-7细胞移植瘤生长的抑制作用 | 第68-70页 |
| 4 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 BMP-2对ERα-6的诱导表达 | 第71-81页 |
| 1 前言 | 第71-72页 |
| 2 实验方法 | 第72-74页 |
| ·real-time PCR检测ERα,ERα-66,ERα-36的表达 | 第72-73页 |
| ·设计ERα-36特异性肽段 | 第73页 |
| ·IV10的肽段合成 | 第73页 |
| ·ERα-36的特异性抗体的制备 | 第73-74页 |
| ·real-time PCR检测ERα,ERα-66,ERα-36的表达 | 第74页 |
| ·WB检测MCF-7细胞内源ERα-36的表达(见4.4) | 第74页 |
| ·WB检测BMP-2对MCF-7和MDA-MB-231细胞ERα-36的诱导表达 | 第74页 |
| ·BMP-2对ERα-36诱导表达的剂量依赖性,且受BMP2的特异性抑制剂noggin的抑制 | 第74页 |
| ·在BMPR1a与BMPR1b干扰RNA的共同作用下,BMP-2对ERα-6的表达受到抑制 | 第74页 |
| 3 实验结果 | 第74-80页 |
| ·mRNA水平检测BMP-2对乳腺癌细胞中雌激素受体表达的上调作用 | 第74-76页 |
| ·ERα-36碳端特异性肽段IV10合成及纯化后进行HPLC和质谱检测 | 第76-77页 |
| ·用自制特异性ERα-36抗体,WB检测MCF-7细胞内源ERα-36的表达 | 第77-78页 |
| ·WB检测BMP-2对两个细胞株ERα-36的诱导表达 | 第78-79页 |
| ·BMP-2对ERα-36诱导表达的剂量依赖性,且受BMP2的特异性抑制剂noggin的抑制 | 第79页 |
| ·在BMPR1a与BMPR1b干扰RNA的共同作用下,BMP-2对MDA-MB-231细胞中ERα-36的诱导表达受到抑制 | 第79-80页 |
| 4 小结 | 第80-81页 |
| 第六章 BMP-2对乳腺癌迁移的促进作用 | 第81-95页 |
| 1 前言 | 第81-82页 |
| ·乳腺癌转移的生理过程 | 第81页 |
| ·原子力显微镜技术在细胞形态观察上的应用 | 第81-82页 |
| ·CD44与肿瘤转移的关系 | 第82页 |
| 2 实验方法 | 第82-84页 |
| ·rhBMP-2对MCF-7细胞的诱导的剂量依赖性 | 第82页 |
| ·AFM样品的制备和观察 | 第82-83页 |
| ·划痕愈合实验 | 第83页 |
| ·细胞体外侵袭(transwell)实验 | 第83-84页 |
| 3 结果 | 第84-94页 |
| ·光学显微镜观察不同浓度rhBMP-2诱导下MCF-7细胞迁移表型的出现 | 第84-85页 |
| ·单个MCF-7细胞的AFM观察 | 第85-86页 |
| ·多个MCF-7细胞的AFM扫描 | 第86页 |
| ·rhBMP2(30ng/ml)诱导24h组细胞伪足的AFM观察 | 第86-88页 |
| ·划痕愈合实验 | 第88-89页 |
| ·细胞体外侵袭实验 | 第89-90页 |
| ·BMP-2对与转移相关的基因的诱导表达 | 第90-91页 |
| ·BMP-2对Balb/c小鼠乳腺癌4T1细胞肺转移的促进作用 | 第91-94页 |
| 4 小结 | 第94-95页 |
| 第七章 论文讨论与展望 | 第95-99页 |
| ·讨论 | 第95-98页 |
| ·展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 附录 | 第109-127页 |
| 缩写词中英文对照 | 第127-129页 |
| 在校期间科研成果发表论文清单 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
