| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.前言 | 第14页 |
| 2.猪肉质的影响因素 | 第14-17页 |
| ·遗传因素 | 第14页 |
| ·影响猪肌肉品质性状的主效基因 | 第14-16页 |
| ·营养因素 | 第16-17页 |
| ·动物福利与宰前应激因素 | 第17页 |
| 3.糖原代谢与猪肌肉品质的关系 | 第17-18页 |
| 4.糖原合成酶(GS)基因的研究进展 | 第18-19页 |
| ·糖原合成酶(GS)基因结构和表达分析 | 第18页 |
| ·糖原合成酶(GS)活性的调节 | 第18-19页 |
| ·糖原合成酶(GS)的功能研究 | 第19页 |
| 5.糖原合成酶激酶3(GSK3)的研究进展 | 第19-22页 |
| ·GSK3的结构和表达分析 | 第19-20页 |
| ·GSK3激酶的活性的调节 | 第20页 |
| ·GSK3相关的信号通路 | 第20-21页 |
| ·GSK3β的作用底物 | 第21-22页 |
| 6.胰岛素信号通路与葡萄糖代谢 | 第22-25页 |
| ·胰岛素受体(The insulin receptor) | 第22页 |
| ·胰岛素受体底物蛋白(Insulin-receptor substrates) | 第22-23页 |
| ·抑制胰岛素受体信号通路(Inhibition of insulin-receptor signalling) | 第23-24页 |
| ·PI(3)K和胰岛素的作用(PI(3)K and insulin action) | 第24页 |
| ·胰岛素调节糖原合成(Regulation of glycogen synthesis) | 第24-25页 |
| 7.研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 猪糖原合成酶(GS)与糖原合成酶激酶(GSK3)基因的分离克隆、表达分析及其功能研究 | 第26-73页 |
| 1 引言 | 第26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-31页 |
| ·试验猪群及性状测定 | 第26-27页 |
| ·组织样品 | 第27页 |
| ·主要药品及试剂 | 第27-28页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配制 | 第28-30页 |
| ·载体和菌株、细胞系 | 第30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第30页 |
| ·主要数据库 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·猪GYS1、GYS2、GSK3a和GSK3β基因的分离克隆 | 第31页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第31页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第31页 |
| ·载体连接 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法制备感受态) | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆子鉴定及测序 | 第32页 |
| ·目的基因表达谱分析 | 第32-33页 |
| ·免疫组织化学 | 第33-34页 |
| ·PCR-RFLP检测猪GYS1和GSK3α基因多态性(SNP) | 第34-35页 |
| ·多态标记与性状的关联分析方法 | 第35页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的培养方法 | 第35-37页 |
| ·不同GSK3p亚细胞定位载体构建 | 第37页 |
| ·细胞培养和转染 | 第37-38页 |
| ·Western Blot分析 | 第38-39页 |
| ·荧光素酶相对活性测定与分析 | 第39页 |
| 3. 结果 | 第39-66页 |
| ·猪糖原合成酶基因的研究 | 第39-45页 |
| ·猪GYS1和GYS2基因cDNA全长序列及序列分析 | 第39-40页 |
| ·猪GYS1和GYS2基因的功能域分析 | 第40-41页 |
| ·猪GYS1和GYS2基因的组织表达分析 | 第41-42页 |
| ·免疫组织化学 | 第42页 |
| ·猪GYS1基因的核苷酸多态检测 | 第42-43页 |
| ·猪GYS1基因第5外显子1152(C/T)和启动子区域1432(T/C)遗传变异在不同猪种中的多态性 | 第43-44页 |
| ·GYS1基因Hin6 Ⅰ和MvaI-PCR-RFLP多态性与肉质性状关联分析 | 第44-45页 |
| ·猪糖原合成酶激酶3基因的研究 | 第45-56页 |
| ·猪GSK3α和GSK3β基因cDNA全长序列及序列分析 | 第45-46页 |
| ·猪GSK3α和GSK3β的功能域分析 | 第46页 |
| ·GSK3β基因的不同转录本的鉴定 | 第46-48页 |
| ·GSK3β基因的不同转录本的组织表达分析 | 第48-51页 |
| ·猪GSK3β不同转录本的亚细胞定位结果 | 第51-52页 |
| ·猪GSK3α基因的核苷酸多态检测 | 第52-53页 |
| ·猪GSK3α基因启动子区域遗传变382(G/C)和第三内含子129(G/C)在不同猪种中的多态性 | 第53-55页 |
| ·GSK3α基因Eco47I和MspI-PCR-RFLP多态性与胴体性状关联分析 | 第55-56页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的分离培养以及鉴定 | 第56-58页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的获得 | 第56-57页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的分化 | 第57页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的RT-PCR鉴定 | 第57页 |
| ·细胞免疫化学染色 | 第57-58页 |
| ·在猪骨骼肌卫星细胞中胰岛素对糖原合成酶(GS)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的调节 | 第58-63页 |
| ·胰岛素对猪GSK3β不同转录本的表达影响的研究 | 第58-60页 |
| ·猪GYS1基因在猪骨骼肌卫星细胞分化过程中的表达规律以及胰岛素对其mRNA水平表达影响的研究 | 第60-62页 |
| ·胰岛素在分化的骨骼肌卫星细胞中促进GSK3β的磷酸化水平,降低GS的磷酸化水平 | 第62-63页 |
| ·猪糖原合成酶基因转录调控研究 | 第63-66页 |
| ·猪GYS1和GYS2基因启动子的获得 | 第63页 |
| ·生物信息学预测猪GYS1和GYS2基因启动子转录因子结合位点 | 第63页 |
| ·猪GYS1基因启动子活性检测 | 第63-64页 |
| ·胰岛素对猪GYS1基因启动子活性的影响 | 第64-65页 |
| ·不同GSK3β蛋白形式对猪GYS1启动子活性的影响 | 第65-66页 |
| 4.讨论 | 第66-73页 |
| ·猪GYS1和GYS2基因的序列和组织表达分析 | 第66-67页 |
| ·关于糖原合成酶基因的SNPs与猪肌肉品质性状的关联 | 第67-68页 |
| ·猪GSK3α和GSK3β基因的结构和选择性剪切 | 第68-69页 |
| ·猪GSK3β不同转录本的组织表达分析 | 第69页 |
| ·猪GSK3β不同转录本的亚细胞定位 | 第69-70页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的原代培养方法 | 第70页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的分化 | 第70-71页 |
| ·Insulin对GYS1和GSK 3β不同转录本的转录水平调节 | 第71页 |
| ·Insulin对GS和GSK 3β磷酸化水平的调节 | 第71-72页 |
| ·猪糖原合成酶基因转录调控研究 | 第72-73页 |
| 第三章 猪背最长肌差异表达基因(AMPD1和ALP)的分离鉴定及其骨骼肌表达模式研究 | 第73-85页 |
| 1.前言 | 第73-74页 |
| 2.材料方法 | 第74-75页 |
| ·猪组织样品 | 第74页 |
| ·猪AMPD1和ALP基因克隆 | 第74页 |
| ·实时定量PCR(Real.time RT-PCR) | 第74页 |
| ·不同ALP亚细胞定位 | 第74-75页 |
| 3.结果 | 第75-84页 |
| ·猪AMPD1基因 | 第75-77页 |
| ·猪AMPD1基因的克隆和序列分析 | 第75页 |
| ·AMPD1基因的组织表达谱研究 | 第75页 |
| ·AMPD1基因在大白和梅山猪不同时期肌肉中的表达分析 | 第75-76页 |
| ·AMPD1基因在大白和梅山猪肌肉组织不同肌纤维类型中的表达分析 | 第76-77页 |
| ·猪ALP基因 | 第77-84页 |
| ·猪ALP基因的克隆及其不同转录本的鉴定 | 第77-79页 |
| ·猪ALP基因不同剪切体在大白猪胚胎和成年不同组织中的表达分布 | 第79-80页 |
| ·ALP不同剪切体在猪骨骼肌不同发育阶段发育表达变化 | 第80-81页 |
| ·ALP不同剪切体在猪不同肌纤维类型肌肉中表达变化 | 第81-82页 |
| ·ALP不同转录本在猪骨骼肌卫星细胞分化过程中表达变化 | 第82页 |
| ·ALP不同转录本在猪骨骼肌卫星细胞中的亚细胞定位 | 第82-84页 |
| 4.讨论 | 第84-85页 |
| ·AMPD1基因在骨骼肌中的表达规律 | 第84页 |
| ·猪ALP基因的选择性剪切 | 第84页 |
| ·猪ALP基因在骨骼肌中的表达规律 | 第84-85页 |
| 下一步工作的设想 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 在读期间发表论文 | 第98-99页 |
| 附表 | 第99-106页 |
