| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 第1章 前言 | 第16-26页 |
| 1.1 红系发育 | 第16-17页 |
| 1.2 自噬 | 第17-19页 |
| 1.2.1 自噬的种类 | 第17-18页 |
| 1.2.2 自噬的发生过程 | 第18-19页 |
| 1.3 自噬起始复合物 | 第19-24页 |
| 1.3.1 ATG13基因 | 第19-20页 |
| 1.3.2 ULK1基因 | 第20-22页 |
| 1.3.3 FIP200基因 | 第22-23页 |
| 1.3.4 ATG101基因 | 第23-24页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 第2章 ATG13、ULK1、FIP200、ATG101分别敲低后对K562细胞向红系分化的影响 | 第26-61页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 实验主要用到的仪器 | 第26页 |
| 2.1.2 实验用到的细胞株及质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.4 实验相关试剂的配制 | 第28-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-44页 |
| 2.2.1 ATG13、ULK1、FIP200、ATG101敲低型表达载体的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.1.1 ATG13、ULK1、FIP200、ATG101基因的siRNA序列 | 第30页 |
| 2.2.1.2 ATG13、ULK1、FIP200、ATG101基因的shRNA序列 | 第30-32页 |
| 2.2.1.3 PLKO载体信息 | 第32页 |
| 2.2.1.4 得到ATG13、ULK1、FIP200、ATG101敲低的PLKO载体 | 第32-34页 |
| 2.2.2 构建PRRL-EGFP-LC3B载体 | 第34-38页 |
| 2.2.2.1 PCR仪扩增EGFP和LC3B及连接EGFP和LC3B | 第34-37页 |
| 2.2.2.2 PRRL载体信息 | 第37页 |
| 2.2.2.3 得到PRRL-EGFP-LC3B绿色荧光载体 | 第37-38页 |
| 2.2.3 慢病毒包装 | 第38-39页 |
| 2.2.4 病毒转染K562细胞及药物筛选 | 第39页 |
| 2.2.5 检测ATG13、ULK1、FIP200、ATG101在K562细胞中的敲低效率 | 第39-41页 |
| 2.2.5.1 实时荧光定量PCR的基因引物序列 | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 敲低K562细胞后提取RNA | 第40页 |
| 2.2.5.3 反转录 | 第40-41页 |
| 2.2.5.4 实时荧光定量PCR | 第41页 |
| 2.2.6 检测ATG13在K562细胞中的蛋白表达水平 | 第41-43页 |
| 2.2.6.1 蛋白质的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.6.2 Western blot | 第42-43页 |
| 2.2.7 Hemin处理K562细胞定向红系分化 | 第43页 |
| 2.2.8 细胞增殖的检测 | 第43页 |
| 2.2.9 联苯胺染色法检测细胞分化 | 第43-44页 |
| 2.2.10 检测细胞凋亡 | 第44页 |
| 2.3 结果与分析 | 第44-59页 |
| 2.3.1 PLKO-sh RNA载体的构建 | 第44-47页 |
| 2.3.2 ATG13、ULK1、FIP200、ATG101基因在K562细胞中的表达情况 | 第47-48页 |
| 2.3.3 ULK1基因在K562细胞中的敲低后的表型 | 第48-50页 |
| 2.3.4 FIP200基因在K562细胞中的敲低后的表型 | 第50-52页 |
| 2.3.5 ATG101基因在K562细胞中的敲低后的表型 | 第52-54页 |
| 2.3.6 ATG13基因在K562细胞中的敲低后的表型 | 第54-56页 |
| 2.3.7 ATG13在K562细胞中的敲低后自噬受阻 | 第56-59页 |
| 2.3.7.1 PRRL-EGFP-LC3B载体的构建 | 第56-58页 |
| 2.3.7.2 转染PRRL-EGFP-LC3B到ATG13敲低的K562细胞 | 第58-59页 |
| 2.4 实验小结 | 第59-61页 |
| 第3章 ATG13基因敲低对CD34~+细胞向红系发育的影响 | 第61-79页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第61-63页 |
| 3.1.1 主要用到的材料与试剂 | 第61页 |
| 3.1.2 实验主要用的仪器 | 第61-62页 |
| 3.1.3 脐带血来源 | 第62页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第62-63页 |
| 3.2 实验方法 | 第63-66页 |
| 3.2.1 脐带血中分离CD34~+细胞的方法 | 第63页 |
| 3.2.2 CD34~+细胞的培养过程 | 第63-64页 |
| 3.2.3 红系早期分化的检测 | 第64页 |
| 3.2.4 红系终末分化的检测 | 第64-65页 |
| 3.2.5 细胞脱核的检测 | 第65页 |
| 3.2.6 MGG染色 | 第65-66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-78页 |
| 3.3.1 ATG13、ULK1、FIP200、ATG101在CD34~+细胞各阶段的表达情况 | 第66-68页 |
| 3.3.2 ATG13基因在CD34~+细胞中的敲低效率 | 第68-69页 |
| 3.3.3 ATG13基因敲低对CD34~+细胞的增殖有抑制作用 | 第69-70页 |
| 3.3.4 ATG13敲低促进人类红系分化过程中的凋亡增加 | 第70-71页 |
| 3.3.5 ATG13基因敲低对CD34~+细胞的早期分化有抑制作用 | 第71-72页 |
| 3.3.6 ATG13敲低使人类红系终末分化略微延迟 | 第72-73页 |
| 3.3.7 ATG13敲低使CD34~+细胞脱核减少 | 第73-74页 |
| 3.3.8 ATG13敲低后对红细胞形态变化的影响 | 第74-75页 |
| 3.3.9 在CD34~+细胞中敲低ATG13后凋亡基因mRNA表达水平的变化 | 第75-78页 |
| 3.4 实验小结 | 第78-79页 |
| 第4章 全文讨论 | 第79-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第89页 |
