| 中英文缩略词 | 第9-11页 |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 1 三种肠道病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.1 小鼠肝炎病毒 | 第14页 |
| 1.2 呼肠孤病毒Ⅲ型 | 第14-15页 |
| 1.3 小鼠诺如病毒 | 第15页 |
| 2 小鼠病毒检测现状 | 第15-16页 |
| 3 核酸检测在实验动物健康监测中的应用 | 第16页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第16-18页 |
| 4.1 调查不同储运条件对小鼠盲肠内容物样品中病毒核酸检测的影响 | 第16-17页 |
| 4.2 分析核酸检测方法在实验动物质量检测中的适用性 | 第17页 |
| 4.3 探究NASBA技术在实验动物病原检测应用中的适用性 | 第17-18页 |
| 第1部分 三种小鼠RNA病毒样品储运条件对核酸检测的影响 | 第18-44页 |
| 材料与方法 | 第19-33页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.1 病毒 | 第19页 |
| 1.2 小鼠盲肠内容物样品 | 第19页 |
| 1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.4 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.5 主要溶液配制 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.1 病毒核酸提取 | 第21-23页 |
| 2.2 MHV、Reo-3、MNV三种病毒PCR靶序列质粒构建 | 第23-29页 |
| 2.3 小鼠盲肠内容物样品的处理 | 第29页 |
| 2.4 测定不同稀释倍数病毒悬液的核酸量 | 第29-30页 |
| 2.5 参考品的制备 | 第30页 |
| 2.6 样品分组及保存 | 第30-31页 |
| 2.7 样品RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.8 探针法实时荧光定量PCR方法检测各时间点样品的三种病毒核酸检出量 | 第32页 |
| 2.9 实验环境 | 第32-33页 |
| 实验结果 | 第33-41页 |
| 1 MHV、Reo-3、MNV三种病毒PCR靶序列扩增 | 第33页 |
| 2 菌落PCR阳性克隆鉴定 | 第33-34页 |
| 3 阳性克隆质粒提取及测序 | 第34-36页 |
| 4 质粒浓度测定及稀释处理 | 第36页 |
| 5 不同稀释倍数的病毒悬液的核酸定量 | 第36-37页 |
| 6 参考品初始病毒核酸量及其在Real-time PCR中的CT值 | 第37页 |
| 7 保存剂对核酸样品检出量的影响 | 第37页 |
| 8 存储温度对样品检出量的影响 | 第37页 |
| 9 保藏时间对样品核酸检出量的影响 | 第37-41页 |
| 讨论 | 第41-43页 |
| 1 实验动物盲肠内容物样品应使用具有抑制RNA酶活性的保存剂进行运输 | 第41页 |
| 2 关于低温运输 | 第41页 |
| 3 关于参考品的起始核酸量 | 第41页 |
| 4 核酸定量检测方法的适用性 | 第41-43页 |
| 小结 | 第43-44页 |
| 第2部分 三种小鼠肠道病毒核酸检测方法在小鼠健康监测中的应用 | 第44-58页 |
| 材料与方法 | 第45-51页 |
| 1 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1 小鼠盲肠内容物样品 | 第45页 |
| 1.2 小鼠血清样品 | 第45页 |
| 1.3 病毒阳性对照质粒 | 第45页 |
| 1.4 主要试剂 | 第45-46页 |
| 1.5 主要仪器 | 第46页 |
| 1.6 主要溶液配制 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-51页 |
| 2.1 小鼠盲肠内容物样品的收集和处理 | 第46页 |
| 2.2 样品核酸提取 | 第46-48页 |
| 2.3 三种病毒核酸检测方法 | 第48页 |
| 2.4 核酸检测结果的判定 | 第48-49页 |
| 2.5 三种病毒血清学检测方法 | 第49页 |
| 2.6 血清学检测结果判定 | 第49-50页 |
| 2.7 数据的统计分析 | 第50-51页 |
| 实验结果 | 第51-54页 |
| 1 MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒在小鼠盲肠内容物的病毒检出情况 | 第51-52页 |
| 2 MHV、Reo-3、MNV三种病毒在小鼠血清样品中的检测结果 | 第52页 |
| 3 MHV、Reo-3、MNV三种病毒核酸检测结果与血清学结果关联分析 | 第52-54页 |
| 讨论 | 第54-57页 |
| 1 小鼠盲肠内容物病毒核酸低拷贝检出的情况 | 第54页 |
| 2 在实验动物健康监控中核酸检测与血清学方法互为补充 | 第54-56页 |
| 3 关于核酸定量的检测结果 | 第56-57页 |
| 小结 | 第57-58页 |
| 第3部分 三种病毒NASBA-ELISA核酸检测方法建立 | 第58-80页 |
| 材料和方法 | 第59-70页 |
| 1 实验材料 | 第59-61页 |
| 1.1 病毒 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第60-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-70页 |
| 2.1 病毒核酸样品的制备 | 第61-62页 |
| 2.2 NASBA-ELISA检测体系的建立 | 第62-67页 |
| 2.3 一步法RT-PCR检测病毒核酸方法 | 第67-70页 |
| 实验结果 | 第70-77页 |
| 1 NASBA扩增产物的凝胶电泳检测 | 第70-71页 |
| 2 NASBA扩增产物的ELISA检测 | 第71页 |
| 3 SV、Reo-3、MHV三种病毒一步法RT-PCR扩增产物 | 第71页 |
| 4 SV-pMD19、Reo-3-pMD19、MHV-pMD19质粒阳性克隆筛选 | 第71-72页 |
| 5 阳性克隆质粒测序 | 第72-75页 |
| 6 RT-PCR方法的敏感性分析 | 第75-77页 |
| 讨论 | 第77-79页 |
| 1 NASBA扩增产物的检测 | 第77页 |
| 2 RT-PCR方法的敏感性差异 | 第77页 |
| 3 比较NASBA方法和RT-PCR方法在小鼠病毒检测应用中的特点 | 第77-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 总结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人信息 | 第85-86页 |
