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转AM79-EPSPS耐除草剂基因大豆新材料的创制

致谢第9-10页
缩略词表第10-11页
摘要第11-12页
Abstract第12页
1. 引言第14-28页
    1.1 转基因作物现状第14-18页
        1.1.1 全球转基因作物现状第14-15页
        1.1.2 我国转基因作物现状第15-17页
        1.1.3 大豆转基因现状第17-18页
    1.2 大豆转化方法第18-21页
        1.2.1 农杆菌转化法第18-19页
        1.2.2 基因枪法第19-20页
        1.2.3 电击法第20页
        1.2.4 PEG法第20页
        1.2.5 花粉管通道法第20-21页
    1.3 大豆转化外植体选择第21-22页
    1.4 耐除草剂基因的研究进展第22-26页
    1.5 研究目的与意义第26-28页
2. 转AM79-EPSPS基因大豆高效转化体系的建立第28-38页
    2.1 实验材料第28-30页
        2.1.1 大豆受体材料第28页
        2.1.2 菌株及载体第28-29页
        2.1.3 实验所用试剂第29-30页
        2.1.4 实验所用仪器第30页
    2.2 实验方法第30-34页
        2.2.1 培养基的配制第30-31页
        2.2.2 不同消毒时间对大豆外植体萌发率和污染率的影响第31页
        2.2.3 大豆外植体预培养第31-32页
        2.2.4 农杆菌菌液制备第32页
        2.2.5 不同草甘膦浓度对外植体出芽率的影响第32页
        2.2.6 农杆菌侵染及共培养基中不同AS浓度对出芽率和芽伸长率的影响第32-33页
        2.2.7 不同IBA浸没时间对不定芽生根率的影响第33页
        2.2.8 再生苗炼苗及移栽第33-34页
    2.3 结果与分析第34-37页
        2.3.1 不同消毒时间对大豆外植体萌发率和污染率的影响分析第34-35页
        2.3.2 不同草甘膦浓度对外植体出芽率的影响分析第35页
        2.3.3 不同AS浓度对出芽率和抗性芽伸长率的影响分析第35-36页
        2.3.4 IBA浸没时间对再生苗生根率的影响分析第36-37页
    2.4 小结与讨论第37-38页
3. 转AM79-EPSPS基因抗草甘膦大豆新品种的鉴定第38-51页
    3.1 实验方法第38-44页
        3.1.1 植物基因组DNA小量提取第38-39页
        3.1.2 PCR检测方法第39页
        3.1.3 转基因大豆再生苗的草甘膦鉴定第39-40页
        3.1.4 抗性植株后代分子特征分析第40-44页
            3.1.4.1 酶联免疫吸附(ELISA)法检测外源基因的表达第40-41页
            3.1.4.2 RT-PCR检测第41-42页
            3.1.4.3 Western blot检测第42页
            3.1.4.4 Southern blot检测第42-44页
    3.2 结果与分析第44-51页
        3.2.1 再生苗PCR结果分析第44页
        3.2.2 草甘膦抗性鉴定结果第44-45页
        3.2.3 外源蛋白在转基因大豆后代叶片中表达量分析第45-46页
        3.2.4 A6和A8转化事件RT-PCR分析第46-47页
        3.2.5 Western blot检测结果分析第47-48页
        3.2.6 Southern blot结果分析第48-50页
        3.2.7 小结与讨论第50-51页
4. AM79-EPSPS蛋白安全性预测第51-69页
    4.1 AM79-EPSPS蛋白的结构与功能第52-53页
    4.2 AM79-EPSPS蛋白的致敏性预测第53-59页
        4.2.1 采用在线过敏原数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性第53-55页
        4.2.2 采用过敏蛋白结构数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性第55-57页
        4.2.3 采用Allergenia数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性第57-58页
        4.2.4 采用SORTALLER数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性第58-59页
        4.2.5 AM79-EPSPS蛋白的致敏性预测结论第59页
    4.3 蛋白质AM79-EPSPS与已知毒蛋白的氨基酸序列比对第59-65页
        4.3.1 NCBI数据库中新表达蛋白质与已知毒蛋白的氨基酸序列比对第59-64页
        4.3.2 AM79-EPSPS蛋白与其它数据库中已知毒蛋白的氨基酸序列比对第64-65页
        4.3.3 AM79-EPSPS与已知毒蛋白的氨基酸序列比对结论第65页
    4.4 AM79-EPSPS与已知抗营养因子的氨基酸序列比对第65-69页
        4.4.1 AM79-EPSPS与已知不同种类抗营养因子的氨基酸序列比对第65-67页
        4.4.2 AM79-EPSPS与已知抗营养因子的氨基酸序列比对结论第67-69页
    4.5 小结与讨论第69页
参考文献第69-78页

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