| 致谢 | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 1. 引言 | 第14-28页 |
| 1.1 转基因作物现状 | 第14-18页 |
| 1.1.1 全球转基因作物现状 | 第14-15页 |
| 1.1.2 我国转基因作物现状 | 第15-17页 |
| 1.1.3 大豆转基因现状 | 第17-18页 |
| 1.2 大豆转化方法 | 第18-21页 |
| 1.2.1 农杆菌转化法 | 第18-19页 |
| 1.2.2 基因枪法 | 第19-20页 |
| 1.2.3 电击法 | 第20页 |
| 1.2.4 PEG法 | 第20页 |
| 1.2.5 花粉管通道法 | 第20-21页 |
| 1.3 大豆转化外植体选择 | 第21-22页 |
| 1.4 耐除草剂基因的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第26-28页 |
| 2. 转AM79-EPSPS基因大豆高效转化体系的建立 | 第28-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 大豆受体材料 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验所用试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验所用仪器 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第30-31页 |
| 2.2.2 不同消毒时间对大豆外植体萌发率和污染率的影响 | 第31页 |
| 2.2.3 大豆外植体预培养 | 第31-32页 |
| 2.2.4 农杆菌菌液制备 | 第32页 |
| 2.2.5 不同草甘膦浓度对外植体出芽率的影响 | 第32页 |
| 2.2.6 农杆菌侵染及共培养基中不同AS浓度对出芽率和芽伸长率的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.7 不同IBA浸没时间对不定芽生根率的影响 | 第33页 |
| 2.2.8 再生苗炼苗及移栽 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.3.1 不同消毒时间对大豆外植体萌发率和污染率的影响分析 | 第34-35页 |
| 2.3.2 不同草甘膦浓度对外植体出芽率的影响分析 | 第35页 |
| 2.3.3 不同AS浓度对出芽率和抗性芽伸长率的影响分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 IBA浸没时间对再生苗生根率的影响分析 | 第36-37页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第37-38页 |
| 3. 转AM79-EPSPS基因抗草甘膦大豆新品种的鉴定 | 第38-51页 |
| 3.1 实验方法 | 第38-44页 |
| 3.1.1 植物基因组DNA小量提取 | 第38-39页 |
| 3.1.2 PCR检测方法 | 第39页 |
| 3.1.3 转基因大豆再生苗的草甘膦鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.4 抗性植株后代分子特征分析 | 第40-44页 |
| 3.1.4.1 酶联免疫吸附(ELISA)法检测外源基因的表达 | 第40-41页 |
| 3.1.4.2 RT-PCR检测 | 第41-42页 |
| 3.1.4.3 Western blot检测 | 第42页 |
| 3.1.4.4 Southern blot检测 | 第42-44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.2.1 再生苗PCR结果分析 | 第44页 |
| 3.2.2 草甘膦抗性鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.2.3 外源蛋白在转基因大豆后代叶片中表达量分析 | 第45-46页 |
| 3.2.4 A6和A8转化事件RT-PCR分析 | 第46-47页 |
| 3.2.5 Western blot检测结果分析 | 第47-48页 |
| 3.2.6 Southern blot结果分析 | 第48-50页 |
| 3.2.7 小结与讨论 | 第50-51页 |
| 4. AM79-EPSPS蛋白安全性预测 | 第51-69页 |
| 4.1 AM79-EPSPS蛋白的结构与功能 | 第52-53页 |
| 4.2 AM79-EPSPS蛋白的致敏性预测 | 第53-59页 |
| 4.2.1 采用在线过敏原数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性 | 第53-55页 |
| 4.2.2 采用过敏蛋白结构数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性 | 第55-57页 |
| 4.2.3 采用Allergenia数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性 | 第57-58页 |
| 4.2.4 采用SORTALLER数据库预测AM79-EPSPS蛋白的致敏性 | 第58-59页 |
| 4.2.5 AM79-EPSPS蛋白的致敏性预测结论 | 第59页 |
| 4.3 蛋白质AM79-EPSPS与已知毒蛋白的氨基酸序列比对 | 第59-65页 |
| 4.3.1 NCBI数据库中新表达蛋白质与已知毒蛋白的氨基酸序列比对 | 第59-64页 |
| 4.3.2 AM79-EPSPS蛋白与其它数据库中已知毒蛋白的氨基酸序列比对 | 第64-65页 |
| 4.3.3 AM79-EPSPS与已知毒蛋白的氨基酸序列比对结论 | 第65页 |
| 4.4 AM79-EPSPS与已知抗营养因子的氨基酸序列比对 | 第65-69页 |
| 4.4.1 AM79-EPSPS与已知不同种类抗营养因子的氨基酸序列比对 | 第65-67页 |
| 4.4.2 AM79-EPSPS与已知抗营养因子的氨基酸序列比对结论 | 第67-69页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
