| 摘要 | 第10-13页 |
| 中英文及缩写对照表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 脂肪的代谢过程及调控作用 | 第16-18页 |
| 1.1 前体脂肪细胞的分化 | 第16页 |
| 1.2 脂肪的分解代谢 | 第16-17页 |
| 1.2.1 脂肪动员 | 第16-17页 |
| 1.2.2 甘油的代谢 | 第17页 |
| 1.2.3 脂肪酸的分解代谢 | 第17页 |
| 1.3 脂肪的合成代谢 | 第17页 |
| 1.3.1 脂肪酸在细胞中合成 | 第17页 |
| 1.3.2 脂肪酸碳链的延长 | 第17页 |
| 1.4 脂肪代谢的调控 | 第17-18页 |
| 1.4.1 脂肪组织中脂肪代谢的调节 | 第17-18页 |
| 1.4.2 肝脏组织中脂肪代谢的调节 | 第18页 |
| 2 支链氨基酸(BCAAs)代谢与调控的研究进展 | 第18-19页 |
| 2.1 支链氨基酸的概念 | 第18页 |
| 2.2 支链氨基酸的生理功能 | 第18-19页 |
| 2.3 BCAT2的生物学功能 | 第19页 |
| 2.4 BCKDHA的生物学功能 | 第19页 |
| 2.5 BCKDHB的生物学功能 | 第19页 |
| 3 MiRNA与脂代谢的相互关系 | 第19-21页 |
| 3.1 miRNA的形成与作用 | 第19-20页 |
| 3.2 miRNA合成过程中的酶成分对脂肪代谢的作用 | 第20页 |
| 3.3 miRNAs对脂肪代谢调控研究进展 | 第20-21页 |
| 3.3.1 参与脂肪细胞分化的miRNAs | 第20-21页 |
| 3.3.2 参与机体的一些信号转导通路的miRNAs | 第21页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-29页 |
| 第二章 绵羊前体脂肪细胞的培养与鉴定 | 第29-38页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 1.1.1 主要的生物试剂 | 第29页 |
| 1.1.2 主要溶液的配制 | 第29页 |
| 1.1.3 试验样品的采集 | 第29-30页 |
| 1.1.4 主要的实验仪器 | 第30页 |
| 1.2 试验方法 | 第30-33页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 1.2.2 细胞传代 | 第30-31页 |
| 1.2.3 细胞冻存 | 第31页 |
| 1.2.4 前体脂肪细胞的诱导分化 | 第31页 |
| 1.2.5 细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| 1.2.6 反转录 | 第31-32页 |
| 1.2.7 引物设计及RT-qPCR | 第32页 |
| 1.2.8 油红O染色 | 第32-33页 |
| 1.2.9 数据处理与分析 | 第33页 |
| 2 结果 | 第33-35页 |
| 2.1 前体脂肪细胞的生长与分化状态 | 第33-34页 |
| 2.2 前体脂肪细胞诱导分化后的油红O染色 | 第34页 |
| 2.3 诱导分化期间标志基因的mRNA表达量变化 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-38页 |
| 第三章 BCAT2和miR-330-5p对绵羊前体脂肪细胞分化过程的影响 | 第38-57页 |
| 1 材料与方法 | 第38-49页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第38-40页 |
| 1.1.1 主要的生物试剂 | 第38页 |
| 1.1.2 主要溶液的配制 | 第38-39页 |
| 1.1.3 试验样品的采集 | 第39页 |
| 1.1.4 主要的试验仪器 | 第39-40页 |
| 1.2 试验方法 | 第40-49页 |
| 1.2.1 HEK-293T细胞的复苏 | 第40页 |
| 1.2.2 HEK-293T细胞的传代 | 第40页 |
| 1.2.3 前体脂肪细胞的培养与诱导分化 | 第40页 |
| 1.2.4 靶标关系预测 | 第40页 |
| 1.2.5 BCAT2-3'-UTR双荧光素酶报告载体的构建 | 第40-45页 |
| 1.2.6 双荧光素酶报告载体荧光活性的检测 | 第45页 |
| 1.2.7 MiR-330-5p mimics/NC的单转染至绵羊前体脂肪细胞的影响 | 第45-46页 |
| 1.2.8 总蛋白的提取与浓度检测 | 第46-49页 |
| 1.2.9 数据处理与分析 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-54页 |
| 2.1 预测的靶标关系 | 第49-50页 |
| 2.2 双荧光素酶活性 | 第50页 |
| 2.3 过表达miR-330-5p后BCAT2的表达量 | 第50-51页 |
| 2.4 绵羊前体脂肪细胞诱导分化过程中BCAT2的表达 | 第51-53页 |
| 2.5 过表达miR-330-5p后PPARγ、C/EBPα、FABP4和ADIPOQ的表达量 | 第53-54页 |
| 2.6 过表达miR-330-5p后的脂滴变化 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第四章 BCKDHB和miR-433-3p对绵羊前体脂肪细胞分化过程的影响 | 第57-69页 |
| 1 材料与方法 | 第57-61页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第57-59页 |
| 1.1.1 主要的生物试剂 | 第57-58页 |
| 1.1.2 主要溶液的配制 | 第58页 |
| 1.1.3 试验样品的采集 | 第58页 |
| 1.1.4 主要的试验仪器 | 第58-59页 |
| 1.2 试验方法 | 第59-61页 |
| 1.2.1 HEK-293T细胞的培养与传代 | 第59页 |
| 1.2.2 前体脂肪细胞的培养与诱导分化 | 第59页 |
| 1.2.3 靶标关系预测 | 第59页 |
| 1.2.4 引物设计 | 第59-60页 |
| 1.2.5 BCKDHB-3'-UTR双荧光素酶报告载体的构建 | 第60页 |
| 1.2.6 双荧光素酶报告载体荧光活性的检测 | 第60页 |
| 1.2.7 MiR-433-3p转染至绵羊前体脂肪细胞 | 第60-61页 |
| 1.2.8 总蛋白的提取、浓度检测与定量检测 | 第61页 |
| 1.2.9 油红0染色 | 第61页 |
| 2 结果 | 第61-65页 |
| 2.1 预测的靶标关系 | 第61页 |
| 2.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第61-62页 |
| 2.3 双荧光素酶活性 | 第62-63页 |
| 2.4 过表达miR-433-3p后BCKDHB的表达量 | 第63页 |
| 2.5 过表达miR-433-3p后BCKDHB蛋白的表达量 | 第63-64页 |
| 2.6 BCKDHB及miR-433-3p表达对脂肪细胞分化的影响 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-66页 |
| 4 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 第五章 BCAT2对绵羊前体脂肪细胞分化的影响 | 第69-81页 |
| 1 材料与方法 | 第69-74页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第69-71页 |
| 1.1.1 主要的生物试剂 | 第69页 |
| 1.1.2 主要溶液的配制 | 第69-70页 |
| 1.1.3 试验样品的采集 | 第70页 |
| 1.1.4 主要的试验仪器 | 第70-71页 |
| 1.2 试验方法 | 第71-74页 |
| 1.2.1 绵羊前体脂肪细胞的培养与传代 | 第71页 |
| 1.2.2 BCAT2过表达载体的构建 | 第71-72页 |
| 1.2.3 pMSCV-BCAT2/siRNA-BCAT2的单转染 | 第72-73页 |
| 1.2.4 总蛋白的提取与浓度检测 | 第73页 |
| 1.2.5 Western blotting | 第73页 |
| 1.2.6 免疫细胞化学 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-79页 |
| 2.1 BCAT2、BCKDHA和BCKDHB在绵羊前体脂肪细胞中的表达 | 第74-75页 |
| 2.2 过表达BCAT2后BCAT2、BCKDHA和BCKDHB的mRNA表达量变化 | 第75页 |
| 2.3 过表达BCAT2后BCAT2、BCKDHA和BCKDHB的蛋白表达量变化 | 第75-76页 |
| 2.4 沉默BCAT2后BCAT2、BCKDHA和BCKDHB的mRNA表达量变化 | 第76页 |
| 2.5 沉默BCAT2后BCAT2、BCKDHA和BCKDHB的蛋白表达量变化 | 第76-77页 |
| 2.6 过表达BCAT2后PPARγ, C/EBPα, FABP4和ADIPOQ的表达量 | 第77页 |
| 2.7 沉默BCAT2后PPARγ、C/EBPα, FABP4和ADIPOQ的表达量 | 第77-78页 |
| 2.8 过表达和沉默BCAT2后的脂滴变化 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79页 |
| 4 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 创新与特色 | 第82-84页 |
| Abstract | 第84-86页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
