| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略语中英文对照 | 第10-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-22页 |
| 1.1 鱼类体色研究进展 | 第16-18页 |
| 1.1.1 鱼类体色的形成及影响因素 | 第16-17页 |
| 1.1.2 鱼类体色相关基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 miRNAs的简介及在鱼类中的研究 | 第18-20页 |
| 1.2.1 miRNAs简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 miRNAs在鱼类中的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 鱼类体色相关miRNAs的研究进展 | 第20-22页 |
| 第二章 锦鲤xdh基因的克隆和表达分析 | 第22-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第22页 |
| 2.1.2 实验设计 | 第22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第23-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-34页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.2 红色锦鲤总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 锦鲤第一链c DNA的合成及中间片段的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.4 红色锦鲤xdh基因的 3'RACE和 5'RACE | 第28-30页 |
| 2.2.5 PCR扩增产物的回收和纯化 | 第30页 |
| 2.2.6 胶回收产物与p MD-19T载体连接 | 第30-31页 |
| 2.2.7 连接产物的转化和阳性克隆的检测 | 第31-32页 |
| 2.2.8 序列的拼接和生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.2.9 红色锦鲤各组织xdh基因的表达分析 | 第32-34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-42页 |
| 2.3.1 红色锦鲤总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.3.2 锦鲤xdh基因中间片段的扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.3 红色锦鲤xdh基因 3'端和 5'端的扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.4 红色锦鲤xdh基因序列的拼接及序列分析 | 第36-38页 |
| 2.3.5 红色锦鲤xdh基因的二级结构预测 | 第38页 |
| 2.3.6 锦鲤xdh基因的同源性和系统发生分析 | 第38-41页 |
| 2.3.7 锦鲤xdh基因组织表达性分析 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 红色锦鲤体色发生观察及锦鲤体色相关基因的表达分析 | 第44-52页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第44-45页 |
| 3.1.1 实验鱼 | 第44页 |
| 3.1.2 红色锦鲤体色发生观察以及实验样品的收集 | 第44页 |
| 3.1.3 红色锦鲤体色发生阶段样品总RNA提取 | 第44页 |
| 3.1.4 第一链c DNA的合成及QRT-PCR | 第44-45页 |
| 3.1.5 xdh、mitfa和tyr荧光定量引物的设计及鉴定 | 第45页 |
| 3.2 实验结果 | 第45-49页 |
| 3.2.1 红色锦鲤体色发生观察 | 第45-47页 |
| 3.2.2 红色锦鲤体色形成阶段xdh基因的表达情况 | 第47页 |
| 3.2.3 红色锦鲤体色形成阶段mitfa基因的表达情况 | 第47-48页 |
| 3.2.4 红色锦鲤体色形成阶段tyr基因的表达情况 | 第48-49页 |
| 3.3 讨论 | 第49-51页 |
| 3.3.1 红色锦鲤不同发育时期体色发生观察 | 第49页 |
| 3.3.2 xdh、mitfa和tyr基因在红色锦鲤体色形成过程中的作用 | 第49-51页 |
| 3.4 结论 | 第51-52页 |
| 第四章 不同体色锦鲤皮肤、鳞片和鳍条中xdh的表达分析 | 第52-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 组织取样及总RNA的提取 | 第52页 |
| 4.2.2 第一链c DNA的合成 | 第52-53页 |
| 4.2.3 不同颜色锦鲤、不同组织部位的xdh基因的q RT-PCR | 第53页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第53-55页 |
| 4.3.1 不同颜色锦鲤皮肤中xdh的表达分析 | 第53页 |
| 4.3.2 不同颜色锦鲤鳞片中xdh的表达分析 | 第53-54页 |
| 4.3.3 不同颜色锦鲤鳍条中xdh的表达分析 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 xdh基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第56-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.1 载体和菌种 | 第56页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第56页 |
| 5.1.3 实验试剂和实验仪器 | 第56页 |
| 5.1.4 培养基及所用试剂的配置 | 第56页 |
| 5.2 方法 | 第56-62页 |
| 5.2.1 锦鲤组织取样及总RNA的提取 | 第56页 |
| 5.2.2 cDNA第一链合成 | 第56-57页 |
| 5.2.3 构建包含抗原决定簇片段序列的基因工程菌 | 第57-60页 |
| 5.2.4 锦鲤xdh基因的原核表达 | 第60页 |
| 5.2.5 目的蛋白检测 | 第60页 |
| 5.2.6 目的蛋白的纯化 | 第60页 |
| 5.2.7 纯化的目的蛋白的western blot检测 | 第60页 |
| 5.2.8 锦鲤xdh多克隆抗体的制备 | 第60-62页 |
| 5.3 实验结果 | 第62-67页 |
| 5.3.1 锦鲤xdh基因抗原决定簇片段引物的设计及克隆 | 第62页 |
| 5.3.2 重组克隆质粒的检测 | 第62-63页 |
| 5.3.3 重组表达质粒的测序鉴定 | 第63页 |
| 5.3.4 重组蛋白的诱导表达，纯化及鉴定 | 第63-66页 |
| 5.3.5 xdh多克隆抗体应用于免疫组化 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-68页 |
| 5.5 小结 | 第68-70页 |
| 第六章 xdh候选miRNAs预测及表达差异分析 | 第70-76页 |
| 6.1 实验材料 | 第70页 |
| 6.1.1 实验样本 | 第70页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第70页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第70页 |
| 6.2 试验方法 | 第70-72页 |
| 6.2.1 组织取样及总RNA的提取 | 第70页 |
| 6.2.2 引物的设计 | 第70-71页 |
| 6.2.3 第一链c DNA合成 | 第71页 |
| 6.2.4 xdh相关miRNAs的预测 | 第71-72页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第72-74页 |
| 6.3.1 不同发育时期体色相关的miRNAs的表达分析 | 第72-73页 |
| 6.3.2 xdh基因与体色相关的miRNAs的预测 | 第73-74页 |
| 6.4 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-88页 |
