| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 生物质能与木质纤维素 | 第12-13页 |
| 1.2 纤维二糖酶概述 | 第13-17页 |
| 1.2.1 纤维二糖酶简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 纤维二糖酶应用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 纤维二糖酶研究进展与趋势 | 第15-17页 |
| 1.3 嗜热酶和嗜热微生物的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 嗜热微生物 | 第17页 |
| 1.3.2 嗜热酶 | 第17-18页 |
| 1.4 大肠杆菌伴侣蛋白的共表达策略 | 第18-19页 |
| 1.5 本论文研究背景、主要内容及意义 | 第19-22页 |
| 1.5.1 研究背景及意义 | 第19-20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 纤维二糖酶在大肠杆菌中的克隆及序列结构分析 | 第22-39页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22-24页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2.4 常用溶液及培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 纤维二糖酶的标准酶活检测方法 | 第26页 |
| 2.3.2 T. aotearoense P8G3 | 第26-27页 |
| 2.3.3 pET30a-bgl的构建 | 第27-31页 |
| 2.3.4 E. coli感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.3.5 pET30a-bgl转化E. coli DH5a | 第31页 |
| 2.3.6 重组质粒pET30a-bgl的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.7 BGL序列同源性分析方法 | 第32-33页 |
| 2.3.8 BGL三维结构预测方法 | 第33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-38页 |
| 2.4.1 T. aotearoense P8G3 | 第33-34页 |
| 2.4.2 pET30a-bgl的构建 | 第34-35页 |
| 2.4.3 BGL序列同源性分析 | 第35-36页 |
| 2.4.4 BGL三维结构分析 | 第36-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 纤维二糖酶的优化表达 | 第39-54页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 伴侣质粒 | 第39页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 主要设备仪器 | 第39-40页 |
| 3.2.4 常用溶液的配置 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-46页 |
| 3.3.1 pET30a-bgl转化E. coli BL21(DE3) | 第41-42页 |
| 3.3.2 E. coli BL21(DE3)/pET30a-bgl表达体系小量表达及表达条件优化 | 第42-43页 |
| 3.3.3 E. coli BL21(DE3)/pET30a-bgl/分子伴侣质粒共表达体系的构建和筛选 | 第43页 |
| 3.3.4 E. coli BL21(DE3)/pET30a-bgl/分子伴侣质粒表达体系小量表达 | 第43-44页 |
| 3.3.5 BGL粗酶液酶活鉴定 | 第44页 |
| 3.3.6 E. coli BL21(DE3)/pET30a-bgl/pGro7 表达体系大量表达 | 第44-45页 |
| 3.3.7 BGL的纯化方法 | 第45-46页 |
| 3.3.8 BGL纯化后酶活测定 | 第46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.4.1 E. coli BL21(DE3)/pET30a-bgl的构建和筛选 | 第46-47页 |
| 3.4.2 E. coli BL21(DE3)/pET30a-bgl诱导表达条件优化 | 第47-48页 |
| 3.4.3 E. coli BL21(DE3)/分子伴侣质粒/pET30a-bgl的构建和筛选 | 第48-49页 |
| 3.4.4 分子伴侣质粒与pET30a-bgl共表达及粗酶液活性鉴定 | 第49-51页 |
| 3.4.5 BGL大量表达及纯化脱盐 | 第51-52页 |
| 3.4.6 BGL纯化后酶活测定 | 第52-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 纤维二糖酶的酶学性质表征及应用 | 第54-67页 |
| 4.1 前言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.3.1 酶学性质表征方法 | 第55-56页 |
| 4.3.2 最适反应条件和稳定性 | 第56页 |
| 4.3.3 金属离子和相关试剂对酶活的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.4 底物特异性 | 第57页 |
| 4.3.5 动力学参数测定 | 第57页 |
| 4.3.6 酶对产物葡萄糖的耐受性 | 第57-58页 |
| 4.3.7 BGL水解纤维二糖 | 第58页 |
| 4.3.8 BGL水解甘蔗渣 | 第58页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第58-65页 |
| 4.4.1 最适反应条件和稳定性 | 第58-59页 |
| 4.4.2 金属离子和相关试剂对酶活的影响 | 第59-60页 |
| 4.4.3 底物特异性 | 第60-61页 |
| 4.4.4 动力学参数 | 第61-62页 |
| 4.4.5 BGL对产物葡萄糖的耐受性 | 第62-65页 |
| 4.4.6 BGL水解纤维二糖和甘蔗渣 | 第65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 结论和展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79页 |
