| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩写表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 油菜再生体系研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 影响油菜再生体系的因素 | 第12-14页 |
| 1.2.2 褐化及玻璃化现象 | 第14页 |
| 1.3 基因组编辑技术研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 锌指核酸酶(ZFN)技术 | 第15页 |
| 1.3.2 转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术 | 第15-16页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas系统 | 第16-18页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas系统在植物中的发展与应用 | 第18页 |
| 1.3.5 CRISPR/Cas9与ZFN和TALEN比较以及CRISPR/Cas9技术存在的问题 | 第18-19页 |
| 1.4 SVP基因研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4.1 SVP基因结构 | 第19-20页 |
| 1.4.2 SVP基因的表达与功能 | 第20-22页 |
| 1.4.3 影响SVP基因表达的因素 | 第22页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 甘蓝型油菜中双11号再生体系的优化 | 第24-36页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 试验材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.2.2 主要药品与试剂 | 第24页 |
| 2.2.3 主要溶液和培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.3 方法与步骤 | 第25-26页 |
| 2.3.1 无菌苗的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 外植体的获取 | 第25-26页 |
| 2.3.3 外植体的愈伤诱导培养 | 第26页 |
| 2.3.4 外植体的分化培养 | 第26页 |
| 2.4 结果与分析 | 第26-35页 |
| 2.4.1 不同浓度2,4-D对外植体愈伤诱导的影响 | 第26-27页 |
| 2.4.2 不同激素配比对外植体分化生长的影响 | 第27-35页 |
| 2.4.3 不同碳源对外植体再生的影响 | 第35页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第35-36页 |
| 第3章 靶向BnSVP的CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建 | 第36-54页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 试验材料与试剂 | 第36-38页 |
| 3.2.1 主要试剂与药品 | 第36页 |
| 3.2.2 主要溶液和培养基配制 | 第36-37页 |
| 3.2.3 菌种与载体 | 第37页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.3 方法与步骤 | 第38-44页 |
| 3.3.1 载体质粒的转化与提取 | 第38页 |
| 3.3.2 引物的设计与合成 | 第38页 |
| 3.3.3 sgRNA表达盒的构建 | 第38-40页 |
| 3.3.4 双靶点sgRNA表达盒与pYLCRISPR/Cas9载体的组装 | 第40-41页 |
| 3.3.5 重组载体的大肠杆菌转化 | 第41页 |
| 3.3.6 阳性重组菌的筛选与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3.7 重组载体的农杆菌转化与阳性菌的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-52页 |
| 3.4.1 载体质粒DNA的提取 | 第44页 |
| 3.4.2 靶向BnSVP的sgRNA设计 | 第44-47页 |
| 3.4.3 靶向BnSVP的sgRNA表达盒的扩增 | 第47页 |
| 3.4.4 sgRNA表达盒与CRISPR/Cas9载体的组装 | 第47-51页 |
| 3.4.5 重组载体的大肠杆菌转化与阳性菌落的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.6 重组载体的农杆菌转化与阳性菌落的鉴定 | 第52页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第52-54页 |
| 3.5.1 靶向多拷贝同源基因的sgRNA的设计 | 第52-53页 |
| 3.5.2 TsgRNA与CRISPR/Cas9载体的组装 | 第53-54页 |
| 第4章 靶向BnSVP的CRISPR/Cas9载体的编辑效率 | 第54-68页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 试验材料与试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第54页 |
| 4.2.2 主要试剂与药品 | 第54页 |
| 4.2.3 主要溶液和培养基配制 | 第54-55页 |
| 4.2.4 菌种与载体 | 第55页 |
| 4.2.5 主要仪器设备 | 第55页 |
| 4.3 方法与步骤 | 第55-59页 |
| 4.3.1 编辑效率检测引物的设计与合成 | 第55页 |
| 4.3.2 编辑效率检测引物的扩增效果检测 | 第55-56页 |
| 4.3.3 原生质体瞬时表达系统的转染与检测 | 第56-57页 |
| 4.3.4 编辑效果的评估 | 第57-59页 |
| 4.4 结果与分析 | 第59-66页 |
| 4.4.1 编辑效率检测引物的设计与合成 | 第59页 |
| 4.4.2 编辑效率检测引物的扩增效果检测 | 第59-61页 |
| 4.4.3 原生质体的分离与转染 | 第61-62页 |
| 4.4.4 不同双靶标编辑载体的编辑效率 | 第62-66页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第66-68页 |
| 4.5.1 原生质体分离 | 第66页 |
| 4.5.2 编辑效率检测引物的设计及其检测效果 | 第66-68页 |
| 第5章 结论与展望 | 第68-69页 |
| 5.1 结论 | 第68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 附录A：中双11号4个BnSVP同源基因的DNA序列 | 第82-87页 |
| 附录B：基本培养基为MS植物培养基 | 第87-88页 |
| 个人简介 | 第88页 |
