| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| 1 全氟烷基化合物(PFAAs)概述 | 第9-13页 |
| 1.1 PFAAs的来源 | 第9页 |
| 1.2 PFAAs的分布现状 | 第9-11页 |
| 1.2.1 PFAAs在环境介质中的分布 | 第9-11页 |
| 1.2.1.1 水体 | 第9-10页 |
| 1.2.1.2 大气 | 第10页 |
| 1.2.1.3 固体介质 | 第10-11页 |
| 1.2.2 PFAAs在生物介质中的分布 | 第11页 |
| 1.2.3 PFAAs在人体中的分布 | 第11页 |
| 1.3 PFAAs的生物转化与代谢 | 第11-13页 |
| 1.3.1 组织分布 | 第11-12页 |
| 1.3.2 代谢动力学 | 第12页 |
| 1.3.3 PFAAs对人的毒理学效应 | 第12-13页 |
| 2 肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)概述 | 第13-16页 |
| 2.1 肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)结构 | 第13页 |
| 2.2 L-FABP与脂肪酸及其类似物结合 | 第13-15页 |
| 2.3 L-FABP参与脂类代谢调节及其机制 | 第15-16页 |
| 3 基因体外表达技术 | 第16-17页 |
| 3.1 表达系统 | 第16页 |
| 3.2 目的蛋白纯化 | 第16-17页 |
| 4 蛋白与小分子相互作用的研究手段 | 第17-20页 |
| 4.1 圆二色谱法(Circular dichroism,CD) | 第17-18页 |
| 4.2 荧光光谱法(fluorescence spectroscopy) | 第18-19页 |
| 4.2.1 荧光猝灭法 | 第18-19页 |
| 4.2.2 荧光敏化法 | 第19页 |
| 4.3 等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,ITC) | 第19页 |
| 4.4 分子对接(Molecular Docking) | 第19-20页 |
| 5 本研究的目的、意义及研究路线 | 第20-21页 |
| 第二章 WT hL-FABP及四种突变体表达与纯化 | 第21-30页 |
| 1 主要试剂 | 第21页 |
| 2 pET28a-hL-FABP质粒及其突变质粒的构建 | 第21-24页 |
| 2.1 培养基配方 | 第21-22页 |
| 2.1.1 LB培养基 | 第21页 |
| 2.1.2 SOC培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 目的基因hL-FABP扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.1 人肝细胞(HL-7702)总RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.2 cDNA模板的制备(2步法) | 第22页 |
| 2.2.3 hL-FABP的PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.3 pET28a-hL-FABP质粒构建 | 第23页 |
| 2.4 pET28a-hL-FABP突变质粒构建 | 第23-24页 |
| 2.4.1 突变凝血酶酶切位点 | 第24页 |
| 2.4.2 突变关键氨基酸残基位点 | 第24页 |
| 3 野生型hL-FABP(WT hL-FABP)及其四种突变体的表达纯化 | 第24-27页 |
| 3.1 hL-FABP过表达 | 第24-25页 |
| 3.2 hL-FABP纯化 | 第25-27页 |
| 4 hL-FABP表达纯化实验结果 | 第27-30页 |
| 4.1 质粒构建电泳结果 | 第27-28页 |
| 4.2 考马斯亮蓝染色检测蛋白过表达结果 | 第28页 |
| 4.3. 考马斯亮蓝染色检测蛋白纯化结果 | 第28-30页 |
| 第三章 hL-FABP与PFAAs相互作用研究 | 第30-52页 |
| 1 实验材料与方法 | 第30-35页 |
| 1.1. 主要试剂 | 第30页 |
| 1.2 圆二色谱检测 | 第30-31页 |
| 1.2.1 实验仪器 | 第30页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 1.3 荧光取代实验 | 第31-32页 |
| 1.3.1 实验仪器 | 第31页 |
| 1.3.2 实验方法 | 第31-32页 |
| 1.4 等温滴定量热法(ITC) | 第32-33页 |
| 1.4.1 实验仪器 | 第32页 |
| 1.4.2 实验方法 | 第32-33页 |
| 1.5 限制性酶切实验 | 第33-34页 |
| 1.6 分子对接实验 | 第34-35页 |
| 2 hL-FABP与PFAAs相互作用实验结果 | 第35-52页 |
| 2.1 圆二色谱结果 | 第35-40页 |
| 2.2 荧光取代结果 | 第40-43页 |
| 2.3 ITC结果 | 第43-49页 |
| 2.4 胰酶酶切结果 | 第49页 |
| 2.5 分子对接结果 | 第49-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-56页 |
| 第五章 总结 | 第56-58页 |
| 1 主要结论 | 第56页 |
| 2 创新点 | 第56-57页 |
| 3 不足与展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 1 pET 28a原核表达载体图谱 | 第64-65页 |
| 2 主要缩略词表 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
