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单环刺螠血红蛋白F-I全长cDNA序列克隆、原核表达及抗菌活性研究

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
第1章 引言第10-26页
    1.1 单环刺螠的研究进展第10-12页
        1.1.1 单环刺螠的简介第10-11页
        1.1.2 单环刺螠的生物学研究第11-12页
    1.2 血红蛋白抗菌的研究进展第12-15页
        1.2.1 血红蛋白抗菌性的发现第12页
        1.2.2 Hemocidins 在体外抗菌的研究进展第12-14页
        1.2.3 Hemocidins 在体内抗菌的研究进展第14页
        1.2.4 Hemocidins 的抗菌机制第14-15页
        1.2.5 展望与应用第15页
    1.3 美洲刺螠血红蛋白 F‐I 的研究概况第15-17页
        1.3.1 美洲刺螠血红蛋白的特点第16页
        1.3.2 美洲刺螠血红蛋白 F-I 全长 cDNA 序列第16-17页
        1.3.3 美洲刺螠血红蛋白 F-I 成熟肽序列第17页
    1.4 研究目的与意义第17-18页
    1.5 研究方法第18-26页
        1.5.1 3’RACE 介绍第18-19页
        1.5.2 5’RACE 介绍第19-20页
        1.5.3 原核表达系统第20-23页
        1.5.4 重组蛋白亲和层析第23-24页
        1.5.5 论文结构安排第24-26页
第2章 单环刺螠血红蛋白 F-I 全长 cDNA 序列的克隆第26-62页
    2.1 实验材料第26-28页
        2.1.1 实验试剂与耗材第26-27页
        2.1.2 主要实验仪器第27页
        2.1.3 主要试剂的配制第27-28页
    2.2 单环刺螠血红蛋白 F‐I 部分 cDNA 序列的克隆第28-34页
        2.2.1 引物设计第28页
        2.2.2 单环刺螠总 RNA 的提取第28-30页
        2.2.3 反转录 PCR第30-31页
        2.2.4 感受态细胞的制备第31页
        2.2.5 纯化 PCR 产物第31-32页
        2.2.6 构建 T 克隆载体第32-33页
        2.2.7 T-A 克隆菌落 PCR 验证第33页
        2.2.8 小提质粒 pUM-TA第33-34页
        2.2.9 双酶切验证及测序第34页
    2.3 3’RACE第34-36页
        2.3.1 引物设计第34-35页
        2.3.2 反转录反应第35页
        2.3.3 套式 PCR 反应第35-36页
        2.3.4 构建 T 克隆载体及验证测序第36页
    2.4 5’RACE第36-40页
        2.4.1 引物设计第36-37页
        2.4.2 去磷酸化反应第37页
        2.4.3 “去帽子”反应第37-38页
        2.4.4 5’RACE Adaptor 的连接第38-39页
        2.4.5 反转录反应第39页
        2.4.6 Outer PCR 反应第39-40页
        2.4.7 Inner PCR 反应第40页
        2.4.8 PCR 产物直接测序第40页
    2.5 生物信息学分析第40-41页
    2.6 结果和分析第41-58页
        2.6.1 部分 cDNA 序列的克隆第41-46页
        2.6.2 3’RACE第46-50页
        2.6.3 5’RACE第50-52页
        2.6.4 生物信息学分析第52-58页
    2.7 小结第58-60页
    2.8 讨论第60-62页
第3章 UuHb-F-I 成熟肽的原核表达、纯化及复性第62-88页
    3.1 实验材料第62-67页
        3.1.1 实验试剂与耗材第62-63页
        3.1.2 主要实验仪器第63-64页
        3.1.3 试剂配制第64-67页
    3.2 成熟肽原核表达载体的构建第67-71页
        3.2.1 引物设计第67-68页
        3.2.2 UuHb-F-I 成熟肽基因的扩增第68-69页
        3.2.3 DNA 双酶切第69页
        3.2.4 表达载体 pET-22b-UuHb-F-I 的构建第69-70页
        3.2.5 重组质粒的鉴定及测序第70-71页
    3.3 重组蛋白的表达及鉴定第71-75页
        3.3.1 IPTG 诱导表达第71页
        3.3.2 SDS-PAGE 电泳第71-73页
        3.3.3 优化 IPTG 诱导条件第73-74页
        3.3.4 乳糖诱导表达第74页
        3.3.5 优化乳糖诱导表达条件第74页
        3.3.6 Western Blot第74-75页
    3.4 重组蛋白的纯化及复性第75-77页
        3.4.1 重组蛋白亲和层析第75-77页
        3.4.2 重组蛋白的复性第77页
    3.5 结果和分析第77-86页
        3.5.1 PCR 扩增成熟肽序列第77-78页
        3.5.2 双酶切 DNA 样品第78页
        3.5.3 重组菌的菌落 PCR 验证第78-79页
        3.5.4 双酶切验证第79-80页
        3.5.5 表达质粒测序第80-81页
        3.5.6 IPTG 诱导重组表达菌第81-83页
        3.5.7 乳糖诱导表达重组表达菌第83-84页
        3.5.8 Western Blot第84-85页
        3.5.9 重组蛋白亲和层析第85-86页
    3.6 小结第86页
    3.7 讨论第86-88页
第4章 重组蛋白的抗菌活性试验第88-98页
    4.1 实验材料第88-90页
        4.1.1 实验试剂与耗材第88页
        4.1.2 主要实验仪器第88-89页
        4.1.3 试剂配制第89-90页
    4.2 蛋白浓度测定第90-91页
    4.3 平板法测活菌数第91-92页
    4.4 抗菌活性试验第92-93页
    4.5 结果和分析第93-95页
        4.5.4 蛋白浓度测定第93-94页
        4.5.5 抗菌试验第94-95页
    4.6 小结第95页
    4.7 讨论第95-98页
第5章 结论第98-100页
参考文献第100-106页
致谢第106-108页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第108页

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