| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第10-26页 |
| 1.1 单环刺螠的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 单环刺螠的简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 单环刺螠的生物学研究 | 第11-12页 |
| 1.2 血红蛋白抗菌的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 血红蛋白抗菌性的发现 | 第12页 |
| 1.2.2 Hemocidins 在体外抗菌的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.3 Hemocidins 在体内抗菌的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.4 Hemocidins 的抗菌机制 | 第14-15页 |
| 1.2.5 展望与应用 | 第15页 |
| 1.3 美洲刺螠血红蛋白 F‐I 的研究概况 | 第15-17页 |
| 1.3.1 美洲刺螠血红蛋白的特点 | 第16页 |
| 1.3.2 美洲刺螠血红蛋白 F-I 全长 cDNA 序列 | 第16-17页 |
| 1.3.3 美洲刺螠血红蛋白 F-I 成熟肽序列 | 第17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.5 研究方法 | 第18-26页 |
| 1.5.1 3’RACE 介绍 | 第18-19页 |
| 1.5.2 5’RACE 介绍 | 第19-20页 |
| 1.5.3 原核表达系统 | 第20-23页 |
| 1.5.4 重组蛋白亲和层析 | 第23-24页 |
| 1.5.5 论文结构安排 | 第24-26页 |
| 第2章 单环刺螠血红蛋白 F-I 全长 cDNA 序列的克隆 | 第26-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验试剂与耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第27页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2 单环刺螠血红蛋白 F‐I 部分 cDNA 序列的克隆 | 第28-34页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第28页 |
| 2.2.2 单环刺螠总 RNA 的提取 | 第28-30页 |
| 2.2.3 反转录 PCR | 第30-31页 |
| 2.2.4 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.5 纯化 PCR 产物 | 第31-32页 |
| 2.2.6 构建 T 克隆载体 | 第32-33页 |
| 2.2.7 T-A 克隆菌落 PCR 验证 | 第33页 |
| 2.2.8 小提质粒 pUM-TA | 第33-34页 |
| 2.2.9 双酶切验证及测序 | 第34页 |
| 2.3 3’RACE | 第34-36页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 2.3.2 反转录反应 | 第35页 |
| 2.3.3 套式 PCR 反应 | 第35-36页 |
| 2.3.4 构建 T 克隆载体及验证测序 | 第36页 |
| 2.4 5’RACE | 第36-40页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第36-37页 |
| 2.4.2 去磷酸化反应 | 第37页 |
| 2.4.3 “去帽子”反应 | 第37-38页 |
| 2.4.4 5’RACE Adaptor 的连接 | 第38-39页 |
| 2.4.5 反转录反应 | 第39页 |
| 2.4.6 Outer PCR 反应 | 第39-40页 |
| 2.4.7 Inner PCR 反应 | 第40页 |
| 2.4.8 PCR 产物直接测序 | 第40页 |
| 2.5 生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 2.6 结果和分析 | 第41-58页 |
| 2.6.1 部分 cDNA 序列的克隆 | 第41-46页 |
| 2.6.2 3’RACE | 第46-50页 |
| 2.6.3 5’RACE | 第50-52页 |
| 2.6.4 生物信息学分析 | 第52-58页 |
| 2.7 小结 | 第58-60页 |
| 2.8 讨论 | 第60-62页 |
| 第3章 UuHb-F-I 成熟肽的原核表达、纯化及复性 | 第62-88页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-67页 |
| 3.1.1 实验试剂与耗材 | 第62-63页 |
| 3.1.2 主要实验仪器 | 第63-64页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第64-67页 |
| 3.2 成熟肽原核表达载体的构建 | 第67-71页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第67-68页 |
| 3.2.2 UuHb-F-I 成熟肽基因的扩增 | 第68-69页 |
| 3.2.3 DNA 双酶切 | 第69页 |
| 3.2.4 表达载体 pET-22b-UuHb-F-I 的构建 | 第69-70页 |
| 3.2.5 重组质粒的鉴定及测序 | 第70-71页 |
| 3.3 重组蛋白的表达及鉴定 | 第71-75页 |
| 3.3.1 IPTG 诱导表达 | 第71页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE 电泳 | 第71-73页 |
| 3.3.3 优化 IPTG 诱导条件 | 第73-74页 |
| 3.3.4 乳糖诱导表达 | 第74页 |
| 3.3.5 优化乳糖诱导表达条件 | 第74页 |
| 3.3.6 Western Blot | 第74-75页 |
| 3.4 重组蛋白的纯化及复性 | 第75-77页 |
| 3.4.1 重组蛋白亲和层析 | 第75-77页 |
| 3.4.2 重组蛋白的复性 | 第77页 |
| 3.5 结果和分析 | 第77-86页 |
| 3.5.1 PCR 扩增成熟肽序列 | 第77-78页 |
| 3.5.2 双酶切 DNA 样品 | 第78页 |
| 3.5.3 重组菌的菌落 PCR 验证 | 第78-79页 |
| 3.5.4 双酶切验证 | 第79-80页 |
| 3.5.5 表达质粒测序 | 第80-81页 |
| 3.5.6 IPTG 诱导重组表达菌 | 第81-83页 |
| 3.5.7 乳糖诱导表达重组表达菌 | 第83-84页 |
| 3.5.8 Western Blot | 第84-85页 |
| 3.5.9 重组蛋白亲和层析 | 第85-86页 |
| 3.6 小结 | 第86页 |
| 3.7 讨论 | 第86-88页 |
| 第4章 重组蛋白的抗菌活性试验 | 第88-98页 |
| 4.1 实验材料 | 第88-90页 |
| 4.1.1 实验试剂与耗材 | 第88页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第88-89页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第89-90页 |
| 4.2 蛋白浓度测定 | 第90-91页 |
| 4.3 平板法测活菌数 | 第91-92页 |
| 4.4 抗菌活性试验 | 第92-93页 |
| 4.5 结果和分析 | 第93-95页 |
| 4.5.4 蛋白浓度测定 | 第93-94页 |
| 4.5.5 抗菌试验 | 第94-95页 |
| 4.6 小结 | 第95页 |
| 4.7 讨论 | 第95-98页 |
| 第5章 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第108页 |
