| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 第一章 L_5-CVN 体外抗病毒活性研究 | 第8-34页 |
| 1 前言 | 第8-15页 |
| 1.1 甲型流感 | 第8-13页 |
| 1.1.1 流感病毒 | 第8页 |
| 1.1.2 甲型流感病毒 | 第8-10页 |
| 1.1.3 甲型流感的侵染机制 | 第10页 |
| 1.1.4 抗甲型流感药物 | 第10-13页 |
| 1.2 蓝藻抗病毒蛋白-N 与连接肽 | 第13-14页 |
| 1.2.1 蓝藻抗病毒蛋白-N | 第13-14页 |
| 1.2.2 连接肽 | 第14页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第14-15页 |
| 1.4 技术路线 | 第15页 |
| 2 实验材料与设备 | 第15-17页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 2.2 细胞与病毒 | 第16页 |
| 2.2.1 细胞 | 第16页 |
| 2.2.2 病毒 | 第16页 |
| 2.3 实验试剂与药物 | 第16-17页 |
| 2.3.1 常用试剂 | 第16页 |
| 2.3.2 试剂配方 | 第16页 |
| 2.3.3 药物 | 第16-17页 |
| 3 实验方法及步骤 | 第17-24页 |
| 3.1 L_5-CVN 与 CVN 的制备 | 第17页 |
| 3.1.1 菌种活化与表达鉴定 | 第17页 |
| 3.1.2 L_5-CVN 与 CVN 的表达与纯化 | 第17-18页 |
| 3.2 ELISA 检测 L_5-CVN 与 HA 蛋白的结合力 | 第18-19页 |
| 3.3 ELISA 检测 L_5-CVN 与 gp120, gp41 蛋白的结合力 | 第19-20页 |
| 3.4 红细胞血凝抑制实验检测 L_5-CVN 对甲型流感病毒 H1N1 的血凝抑制作用 | 第20页 |
| 3.4.1 测定病毒血凝单位 | 第20页 |
| 3.4.2 测定 L_5-CVN 对甲型流感病毒的血凝抑制作用 | 第20页 |
| 3.5 细胞水平检测 L_5-CVN 与 CVN 抗甲型流感的活性 | 第20-24页 |
| 3.5.1 L_5-CVN, CVN 与利巴韦林的细胞毒性检测 | 第20-21页 |
| 3.5.2 L_5-CVN, CVN 与利巴韦林对流感病毒的半数抑制浓度 EC50的测定 | 第21页 |
| 3.5.3 免疫荧光染色观察 L_5-CVN, CVN 与利巴韦林的抗流感病毒作用 | 第21-22页 |
| 3.5.4 L_5-CVN 对甲型流感病毒增殖不同阶段的影响研究 | 第22-24页 |
| 4 实验结果与讨论 | 第24-32页 |
| 4.1 L_5-CVN 与 HA 蛋白的结合作用 | 第24-25页 |
| 4.2 L_5-CVN 与 gp120, gp41 蛋白的结合作用 | 第25-26页 |
| 4.3 L_5-CVN 对甲型流感病毒的血凝抑制作用 | 第26-27页 |
| 4.4 L_5-CVN 在细胞水平上的抗甲型流感病毒的作用研究 | 第27-32页 |
| 4.4.1 L_5-CVN，CVN 与利巴韦林的细胞毒性 | 第27-28页 |
| 4.4.2 L_5-CVN, CVN 与利巴韦林对三株流感病毒的半数抑制浓度 EC50 | 第28-29页 |
| 4.4.3 免疫荧光染色观察 L_5-CVN、CVN 与利巴韦林对三株流感病毒的抑制作用 | 第29-31页 |
| 4.4.4 不同加药方式对 L_5-CVN 抗流感病毒作用的影响 | 第31-32页 |
| 5 结论与展望 | 第32-34页 |
| 第二章 N-末端氨基酸在 CVN 抗病毒活动中的作用 | 第34-65页 |
| 1 前言 | 第34-41页 |
| 1.1 HIV 病毒与 AIDS | 第34-38页 |
| 1.1.1 HIV | 第34-36页 |
| 1.1.2 AIDS 的发病机理 | 第36页 |
| 1.1.3 AIDS 治疗方案研究进展 | 第36-37页 |
| 1.1.4 抗 HIV 病毒的药物 | 第37-38页 |
| 1.2 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N)与其抗 HIV 病毒机制 | 第38-39页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第39-40页 |
| 1.4 技术路线 | 第40-41页 |
| 2 实验材料与设备 | 第41-45页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第41页 |
| 2.2 DNA | 第41页 |
| 2.3 菌株 | 第41页 |
| 2.4 实验试剂 | 第41-45页 |
| 2.4.1 常用试剂 | 第42页 |
| 2.4.2 工具酶 | 第42页 |
| 2.4.3 分子量参照物 | 第42页 |
| 2.4.4 试剂配方 | 第42-45页 |
| 3 实验方法及步骤 | 第45-60页 |
| 3.1 三种 pET-3c-突变体 CV-N 表达质粒的构建与序列分析 | 第45-51页 |
| 3.1.1 引物设计与合成 | 第45-46页 |
| 3.1.2 PCR 合成三种 pET-3c-突变体 CV-N 质粒全序列 | 第46-48页 |
| 3.1.3 电泳分析 | 第48页 |
| 3.1.4 胶回收 PCR 扩增产物 | 第48-49页 |
| 3.1.5 DpnI 处理模板 | 第49页 |
| 3.1.6 DH5α大肠杆菌感受态制备 | 第49-50页 |
| 3.1.7 重组质粒转化 DH5α大肠杆菌感受态 | 第50页 |
| 3.1.8 序列分析 | 第50-51页 |
| 3.2 Pet-3c-Leu1-Delete-CVN 表达质粒的构建 | 第51-55页 |
| 3.2.1 Leu1-Delete-CVN 基因的合成 | 第51-52页 |
| 3.2.2 表达载体 pET-3c 质粒的抽提 | 第52-53页 |
| 3.2.3 Leu1-Delete-CVN DNA 和表达载体 pET-3c 的双酶切 | 第53-54页 |
| 3.2.4 酶切产物回收 | 第54页 |
| 3.2.5 酶连 | 第54-55页 |
| 3.2.6 重组质粒转化 DH5α大肠杆菌感受态 | 第55页 |
| 3.2.7 重组子的鉴定 | 第55页 |
| 3.3 四种突变体 CVN 在大肠杆菌中的表达 | 第55-59页 |
| 3.3.1 BL21(DE3)大肠杆菌感受态的制备 | 第55-56页 |
| 3.3.2 重组质粒的转化 | 第56页 |
| 3.3.3 表达菌的筛选 | 第56-57页 |
| 3.3.4 菌种培养和 CVN 突变体蛋白表达的诱导 | 第57页 |
| 3.3.5 CVN 突变体蛋白表达的 SDS-PAGE 鉴定 | 第57页 |
| 3.3.6 CVN 突变体蛋白表达的 Western Blot 鉴定 | 第57-59页 |
| 3.4 WesternBlot 鉴定四种 CVN 蛋白突变体与 gp41 的结合活性 | 第59-60页 |
| 4 实验结果与讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 重组 CVN 突变体的表达 | 第60-63页 |
| 4.1.1 重组质粒的构建三种 pET-3c-突变体 CVN 质粒的构建 | 第60-61页 |
| 4.1.2 pET-3c-Leu1-Delete-CVN 质粒的构建 | 第61-62页 |
| 4.1.3 三种 CVN 突变体在表达菌株 BL21(DE3)中的表达 | 第62-63页 |
| 4.2 CVN 突变体与 gp41 结合力检测 | 第63-64页 |
| 5 结论与展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 资金资助 | 第67-68页 |
| 在读期间发表论文 | 第68-69页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
