| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 SSCs的分离 | 第14-15页 |
| 1.2 SSCs的纯化 | 第15-16页 |
| 1.3 SSCs的培养 | 第16-19页 |
| 1.3.1 血清培养体系正在被无血清培养体系所代替 | 第16-17页 |
| 1.3.2 无饲养层培养正在成为SSCs培养体系的发展方向 | 第17-18页 |
| 1.3.3 细胞因子对SSCs自我更新的作用因SSCs的来源而异 | 第18页 |
| 1.3.4 无血清无饲养层SSCs培养还面临许多挑战 | 第18-19页 |
| 1.4 SSCs的鉴定 | 第19-20页 |
| 1.4.1 移植试验法鉴定SSCs | 第19页 |
| 1.4.2 碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AP)染色法鉴定SSCs | 第19页 |
| 1.4.3 免疫组织(细胞)化学染色法鉴定SSCs | 第19-20页 |
| 1.4.4 逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction,RT-PCR)检测法鉴定SSCs | 第20页 |
| 1.4.5 流式细胞分析法法鉴定SSCs | 第20页 |
| 1.5 研究展望 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的立题依据及研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 不同方法纯化SSCS后培养效果的比较 | 第22-35页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 主要试验动物 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试验试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 主要试验仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.4 主要试验试剂的配制 | 第24-25页 |
| 2.3 方法 | 第25-30页 |
| 2.3.1 小鼠睾丸单细胞悬液的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 培养皿的明胶铺板 | 第25页 |
| 2.3.3 小鼠MEF饲养层细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.3.4 MEF的冻存和复苏 | 第26页 |
| 2.3.5 丝裂霉素C处理MEF | 第26-27页 |
| 2.3.6 差速贴壁法分选SSCs | 第27页 |
| 2.3.7 不连续percoell密度梯度离心法分选SSCs | 第27-28页 |
| 2.3.8 形态学分选法分选SSCs | 第28-29页 |
| 2.3.9 MACS分选SSCs | 第29-30页 |
| 2.4 结果 | 第30-33页 |
| 2.4.1 小鼠睾丸单细胞悬液结果 | 第30-31页 |
| 2.4.2 MEF饲养层在丝裂霉素C处理前后生长结果 | 第31页 |
| 2.4.3 SSCs差速贴壁分选后培养结果 | 第31-32页 |
| 2.4.4 不连续Percoell密度梯度法分选SSCs | 第32-33页 |
| 2.4.5 磁珠分选后细胞培养结果 | 第33页 |
| 2.5 不同方法分选后培养结果分析 | 第33-35页 |
| 第三章 免疫磁珠分选SSCS的效果 | 第35-46页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料方法 | 第35-41页 |
| 3.2.1 主要试验设备 | 第35页 |
| 3.2.2 主要试验试剂及其配制 | 第35-36页 |
| 3.2.3 RNA的提取 | 第36-38页 |
| 3.2.4 RNA浓度的测量及质量检测 | 第38页 |
| 3.2.5 反转录反应(合成CDNA) | 第38-39页 |
| 3.2.6 RT-PCR | 第39-40页 |
| 3.2.7 流式细胞分析 | 第40-41页 |
| 3.3 结果 | 第41-44页 |
| 3.3.1 两种方法提取的RNA质量检测 | 第41-42页 |
| 3.3.2 Trizol法提取的RNA浓度 | 第42页 |
| 3.3.3 RT-PCR结果 | 第42-43页 |
| 3.3.4 流式细胞分析结果 | 第43-44页 |
| 3.4 结果分析 | 第44-46页 |
| 第四章 SSCS的鉴定 | 第46-57页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 主要试验设备 | 第46页 |
| 4.3 主要试验试剂及其配制 | 第46-47页 |
| 4.4 鉴定方法 | 第47-52页 |
| 4.4.1 AP染色鉴定SSCs | 第47页 |
| 4.4.2 免疫荧光染色鉴定SSCs | 第47-48页 |
| 4.4.3 逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction,RT-PCR)鉴定SSCs | 第48-50页 |
| 4.4.4 移植试验鉴定SSCs | 第50-51页 |
| 4.4.5 基因组PCR检测后代鼠 | 第51-52页 |
| 4.5 鉴定结果及分析 | 第52-57页 |
| 4.5.1 AP染色检测SSCs结果 | 第52-53页 |
| 4.5.2 免疫荧光染色检测SSCs | 第53页 |
| 4.5.3 RT-PCR检测SSCs | 第53-54页 |
| 4.5.4 移植试验后代检测结果 | 第54-57页 |
| 第五章 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
