| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 第一章 胚胎干细胞及p57基因的研究进展 | 第13-24页 |
| 1.1 胚胎干细胞 | 第13-20页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的概念 | 第13页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞的多能性及维持自我更新的分子机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 胚胎干细胞的细胞周期及与多能性的关系 | 第14-18页 |
| 1.1.4 胚胎干细胞的自我更新及凋亡 | 第18-20页 |
| 1.1.5 胚胎干细胞的DNA甲基化修饰 | 第20页 |
| 1.2 p57基因 | 第20-22页 |
| 1.2.1 p57基因对细胞周期及细胞增殖的调控 | 第20-21页 |
| 1.2.2 p57基因对干细胞自我更新及凋亡的调控 | 第21-22页 |
| 1.2.3 p57基因对甲基化相关蛋白的调控 | 第22页 |
| 1.3 p57基因调控胚胎发育的研究进展 | 第22-24页 |
| 试验研究 | 第24-50页 |
| 第二章 干扰p57促进小鼠胚胎干细胞的增殖 | 第24-37页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器及耗材 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 主要溶液配制 | 第25页 |
| 2.2.2 p57慢病毒干扰载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.3 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)制成饲养层 | 第26页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第26页 |
| 2.2.5 生长曲线及CCK8检测细胞活力 | 第26-27页 |
| 2.2.6 实时定量PCR检测鉴定 | 第27页 |
| 2.2.7 碱性磷酸酶(AP)染色及克隆面积统计分析 | 第27页 |
| 2.2.8 Edu染色分析 | 第27-28页 |
| 2.2.9 蛋白质提取、变性及蛋白浓度测定 | 第28页 |
| 2.2.10 蛋白免疫印迹和免疫检测相关蛋白 | 第28-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-35页 |
| 2.3.1 p57慢病毒载体的构建及验证 | 第30-31页 |
| 2.3.2 胚胎干细胞干扰p57后对克隆形态及面积大小的影响 | 第31-33页 |
| 2.3.3 胚胎干细胞干扰p57后对增殖能力的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.4 胚胎干细胞干扰p57后对增殖相关基因和多能性相关基因的影响 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 p57干扰对胚胎干细胞凋亡过程的影响 | 第37-44页 |
| 3.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 主要仪器及耗材 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 TUNEL染色检测 | 第37页 |
| 3.2.2 Annexin V/PI凋亡染色分析 | 第37-38页 |
| 3.2.3 实时定量PCR检测鉴定 | 第38页 |
| 3.2.4 Western Blotting检测凋亡相关蛋白 | 第38页 |
| 3.2.5 双光子载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3 结果 | 第39-43页 |
| 3.3.1 TUNEL染色法检测干扰p57对胚胎干细胞凋亡的影响 | 第39页 |
| 3.3.2 干扰p57对胚胎干细胞凋亡相关基因及蛋白的调控检测 | 第39-41页 |
| 3.3.3 利用双光子表达质粒分析p57与p53的互作 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 MG132抑制57降解对胚胎干细胞多能性的影响 | 第44-50页 |
| 4.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器及耗材 | 第44页 |
| 4.2 方法 | 第44-45页 |
| 4.2.1 免疫荧光染色 | 第44-45页 |
| 4.2.2 Western Blotting检测 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45页 |
| 4.3.1 MG132处理对胚胎干细胞生长及多能性的影响 | 第45页 |
| 4.3.2 MG132处理对胚胎干细胞甲基化的影响 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.5 小结 | 第46-50页 |
| 结论 | 第50页 |
| 本文研究的创新点及进一步研究 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
| 缩略词 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
