| 缩略语表 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 文献回顾 | 第15-21页 |
| 第一部分 慢病毒载体感染人胆管细胞系的建立 | 第21-30页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 细胞系 | 第21页 |
| 1.2 质粒和慢病毒 | 第21-22页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第22-23页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| 2.1 慢病毒载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2 细胞培养 | 第24页 |
| 2.3 慢病毒感染细胞 | 第24-25页 |
| 2.4 细胞总RNA提取以及定量 | 第25页 |
| 2.5 荧光实时定量PCR | 第25-26页 |
| 2.5.1 mRNA反转录 | 第25页 |
| 2.5.2 RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.6 Western Blot | 第26-27页 |
| 2.6.1 细胞总蛋白的制备 | 第26页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE | 第26页 |
| 2.6.3 Western Blot | 第26-27页 |
| 2.7 统计学处理 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第二部分 角蛋白8表达量异常与人胆管上皮细胞凋亡之间的关系 | 第30-41页 |
| 1 材料和仪器 | 第30-31页 |
| 1.1 细胞系 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| 2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 2.2 慢病毒感染细胞 | 第31-32页 |
| 2.3 激光共聚焦显微镜观察角蛋白以及细胞核形态 | 第32页 |
| 2.4 激光共聚焦显微镜观察活细胞线粒体形态变化 | 第32页 |
| 2.5 流式细胞仪检测细胞内ROS含量 | 第32-33页 |
| 2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第33页 |
| 2.7 Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达 | 第33-34页 |
| 2.8 统计学处理 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-38页 |
| 3.1 过表达以及干扰CK8细胞角蛋白形态发生变化 | 第34页 |
| 3.2 过表达及干扰CK8与细胞的凋亡正相关 | 第34-36页 |
| 3.3 过表达及干扰CK8后线粒体的形态和功能的变化 | 第36-37页 |
| 3.4 过表达及干扰CK8后细胞凋亡相关蛋白以及凋亡相关信号通路蛋白的变化 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 第三部分 胆汁酸盐促进角蛋白8表达异常的人胆管上皮细胞凋亡 | 第41-54页 |
| 1 材料和仪器 | 第41-43页 |
| 1.1 细胞株 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-45页 |
| 2.1 细胞培养 | 第43页 |
| 2.2 慢病毒感染细胞 | 第43页 |
| 2.3 激光共聚焦显微镜观察角蛋白以及细胞核形态 | 第43-44页 |
| 2.4 激光共聚焦显微镜观察活细胞中线粒体形态的动态变化 | 第44页 |
| 2.5 流式细胞仪检测细胞内ROS的含量 | 第44页 |
| 2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 2.7 Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达 | 第45页 |
| 2.8 统计学处理 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| 3.1 胆汁酸盐促进过表达以及干扰CK8慢病毒载体感染的RBE细胞凋亡 | 第45-47页 |
| 3.2 胆汁酸盐促进过表达及干扰CK8后细胞线粒体损伤 | 第47-49页 |
| 3.3 GCDC作用过表达及干扰CK8后细胞凋亡相关蛋白以及凋亡相关信号通路蛋白的变化 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 个人简历和研究成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
