| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 中英文对照表 | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一部分 莪术醇对胆管癌细胞生物学行为的影响 | 第15-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 1.1.1 实验试剂及耗材 | 第15-16页 |
| 1.1.2 主要实验仪器 | 第16页 |
| 1.2 实验方法 | 第16-20页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第16页 |
| 1.2.2 CCK8法检测莪术醇对胆管癌细胞增殖的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.3 划痕实验检测莪术醇对胆管癌细胞迁移的影响 | 第17页 |
| 1.2.4 流式细胞仪检测莪术醇对胆管癌细胞周期的影响 | 第17页 |
| 1.2.5 流式细胞仪检测莪术醇对胆管癌细胞凋亡率的影响 | 第17-18页 |
| 1.2.6 qRT-PCR分析莪术醇对G1期相关分子的影响 | 第18-20页 |
| 1.2.7 统计学分析 | 第20页 |
| 1.3 实验结果 | 第20-23页 |
| 1.3.1 莪术醇对胆管癌细胞增殖的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.2 莪术醇对胆管癌细胞迁移的影响 | 第21页 |
| 1.3.3 莪术醇对胆管癌细胞周期的影响 | 第21-22页 |
| 1.3.4 莪术醇对胆管癌细胞凋亡的影响 | 第22页 |
| 1.3.5 莪术醇对胆管癌细胞周期G1期相关分子的影响 | 第22-23页 |
| 1.4 实验小结 | 第23-24页 |
| 第二部分 莪术醇抗胆管癌作用的蛋白质组学分析 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 组织标本 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 应用双向电泳技术筛选差异表达蛋白 | 第25-27页 |
| 2.2.2 免疫组织化学、q-RT-PCR及Westernblot验证CDKL3在胆管癌中的表达 | 第27-30页 |
| 2.2.3 统计学分析 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-36页 |
| 2.3.1 蛋白质组学方法筛选莪术醇作用RBE细胞后的差异表达蛋白 | 第30-35页 |
| 2.3.2 免疫组化、Westernbolt、RT-PCR验证CDKL3在胆管癌组织中的表达 | 第35-36页 |
| 2.4 实验小结 | 第36-37页 |
| 第三部分 CDKL3沉默对人胆管癌细胞生物学特性的影响 | 第37-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 3.1.1 主要试剂及材料 | 第38-39页 |
| 3.1.2 主要实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 qRT-PCR法检测CDKL3在三种细胞中的表达丰度 | 第40页 |
| 3.2.2 siRNA靶点设计及目的基因慢病毒载体构建 | 第40-42页 |
| 3.2.3 Westernblot、qRT-PCR检测病毒转染效率 | 第42-43页 |
| 3.2.4 CCK8检测CDKL3沉默对RBE细胞增殖的影响 | 第43页 |
| 3.2.5 划痕实验检测CDKL3沉默对RBE细胞迁移的影响 | 第43页 |
| 3.2.6 流式细胞仪检测CDKL3沉默对RBE细胞周期的影响 | 第43页 |
| 3.2.7 流式细胞仪检测CDKL3沉默对RBE细胞凋亡的影响 | 第43页 |
| 3.2.8 Transwell实验检测CDKL3沉默对RBE细胞侵袭的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.9 统计学分析 | 第44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-47页 |
| 3.3.1 CDKL3基因在胆管癌细胞中表达 | 第44页 |
| 3.3.2 CDKL3基因pFU-GW慢病毒载体构建 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组CDKL3-pFU-GW慢病毒成功转染RBE细胞 | 第45页 |
| 3.3.4 CDKL3基因沉默RBE细胞系mRNA和蛋白表达水平的变化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 CDKL3基因沉默抑制RBE细胞的增殖、迁移和侵袭 | 第46页 |
| 3.3.6 CDKL3基因沉默对RBE细胞周期及凋亡的影响 | 第46-47页 |
| 3.4 实验小结 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-53页 |
| 不足与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 综述 | 第60-70页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 在学期间研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
