| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 一. 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 杆状病毒晚期表达因子 | 第9-19页 |
| 1.1.1 杆状病毒 | 第9-13页 |
| 1.1.2 杆状病毒基因表达调控 | 第13-15页 |
| 1.1.3 杆状病毒晚期表达因子 | 第15-19页 |
| 1.2 小菜蛾颗粒体病毒 | 第19-21页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 二. 实验材料和工具 | 第22-28页 |
| 2.1 试剂与试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 试剂盒 | 第23页 |
| 2.2 酶及分子量标准 | 第23页 |
| 2.3 菌株和细菌培养基 | 第23页 |
| 2.3.1 大肠杆菌菌株 | 第23页 |
| 2.3.2 细菌培养基 | 第23页 |
| 2.4 细胞系和细胞培养基 | 第23-24页 |
| 2.4.1 昆虫细胞系 | 第23-24页 |
| 2.4.2 细胞培养基 | 第24页 |
| 2.5 质粒和引物 | 第24-26页 |
| 2.5.1 克隆载体 | 第24-26页 |
| 2.5.2 AcMNPV瞬时表达实验系统 | 第26页 |
| 2.5.3 测序引物 | 第26页 |
| 2.6 病毒株 | 第26-27页 |
| 2.7 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 三. 实验方法和步骤 | 第28-40页 |
| 3.1 PlxyGV cosmid文库的构建 | 第28-33页 |
| 3.1.1 小菜蛾的饲养 | 第28页 |
| 3.1.2 病毒的扩增和纯化 | 第28-29页 |
| 3.1.3 病毒DNA的提取 | 第29页 |
| 3.1.4 文库的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.5 文库的筛选 | 第31-33页 |
| 3.2 PlxyGV晚期表达因子瞬时表达质粒文库的构建 | 第33-35页 |
| 3.2.1 目的基因PCR引物设计 | 第33页 |
| 3.2.2 目的基因的扩增和载体的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.3 目的基因和载体的体外双酶切 | 第34页 |
| 3.2.4 体外连接反应 | 第34页 |
| 3.2.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| 3.2.6 重组质粒的筛选和鉴定 | 第35页 |
| 3.3 PlxyGV晚期表达报告质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.1 PlxyGV晚期报告质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.2 PlxyGV极晚期报告质粒的构建 | 第36页 |
| 3.4 瞬时表达实验 | 第36-38页 |
| 3.4.1 细胞培养 | 第36-37页 |
| 3.4.2 转染 | 第37页 |
| 3.4.3 荧光素酶(luciferase,LUC)活性检测 | 第37页 |
| 3.4.4 β-葡萄糖醛酸酶(β-Glucuronidase,GUS)活性检测 | 第37-38页 |
| 3.5 计算机辅助分析 | 第38-40页 |
| 3.5.1 序列比对 | 第38页 |
| 3.5.2 比对数据浏览 | 第38页 |
| 3.5.3 构建进化树 | 第38-39页 |
| 3.5.4 进化树可信度评估 | 第39-40页 |
| 四. 实验结果 | 第40-74页 |
| 4.1 PlxyGV cosmid文库的构建 | 第40-47页 |
| 4.1.1 PlxyGV DNA的提取 | 第40-41页 |
| 4.1.2 文库构建与筛选 | 第41-42页 |
| 4.1.3 PlxyGV基因组DNA cosmid文库的鉴定分析 | 第42-47页 |
| 4.2 PlxyGV晚期表达因子瞬时表达质粒文库和报告质粒 | 第47-52页 |
| 4.3 PlxyGV晚期报告基因在不同细胞系中的瞬时表达实验结果 | 第52-53页 |
| 4.4 PlxyGV瞬时表达实验系统不支持AcMNPV晚期报告质粒表达 | 第53页 |
| 4.5 PlxyGV LEF-2能部分替代AcMNPV LEF-2的功能 | 第53-62页 |
| 4.6 PlxyGV部分晚期表达因子与其它杆状病毒同源蛋白的进化关系 | 第62-74页 |
| 五. 讨论 | 第74-81页 |
| 5.1 PlxyGV受纳细胞系的筛选 | 第74-75页 |
| 5.2 PlxyGV晚期表达因子在Sf-9中的功能分析 | 第75-76页 |
| 5.3 进化树构建方法的分析 | 第76-78页 |
| 5.4 PlxyGV晚期表达因子蛋白的进化特点 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 文章中的缩略词 | 第89-90页 |
| 在校期间撰写的论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
