| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1.1 植物的转录因子 | 第13-19页 |
| 1.2 植物的MADS-box基因 | 第19-30页 |
| 1.2.1 MADS-box基因的结构和分类 | 第19-22页 |
| 1.2.2 MADS-box基因的起源和进化 | 第22-24页 |
| 1.2.3 MADS-box基因的功能 | 第24-30页 |
| 1.3 植物AP1/FUL亚家族的研究概况 | 第30-33页 |
| 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第2章 水稻OsMADS15基因的功能研究 | 第35-59页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第35-39页 |
| 2.1.1 实验材料和试剂配置 | 第35-37页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 2.1.2.1 OsMADS15过量表达载体的构建 | 第37页 |
| 2.1.2.2 日本晴水稻愈伤组织培养 | 第37-38页 |
| 2.1.2.3 农杆菌的准备 | 第38页 |
| 2.1.2.4 农杆菌介导的水稻转化和再生 | 第38页 |
| 2.1.2.5 Real Time-PCR分析开花相关基因的表达水平 | 第38-39页 |
| 2.2 实验结果 | 第39-53页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第39-40页 |
| 2.2.2 日本晴愈伤的培养 | 第40页 |
| 2.2.3 水稻OsMADS15转基因植株的获得和RT-PCR检验 | 第40-41页 |
| 2.2.4 OsMADS15过表达植株的表型观察和分析 | 第41-48页 |
| 2.2.5 蛋白质双向电泳分析差异蛋白 | 第48-53页 |
| 2.3 讨论 | 第53-59页 |
| 2.3.1 OsMADS15是拟南芥FUL的直系同源基因 | 第53-55页 |
| 2.3.2 OsMADS15主要在开花转变中起作用 | 第55-57页 |
| 2.3.3 OsMADS15基因的变异引起假胎生现象 | 第57-59页 |
| 第3章 水稻cDNA文库的构建 | 第59-81页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第59-73页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第60页 |
| 3.1.3 主要试剂和溶液配制 | 第60-62页 |
| 3.1.3.1 主要试剂和药品 | 第60-61页 |
| 3.1.3.2 各种溶液的配制 | 第61-62页 |
| 3.1.4 实验方法 | 第62-73页 |
| 3.1.4.1 总RNA提取(Trizol提取法) | 第62-63页 |
| 3.1.4.2 mRNA的分离 | 第63-66页 |
| 3.1.4.3 cDNA文库的构建 | 第66-72页 |
| 3.1.4.3.1 反转录合成cDNA第一链 | 第66-67页 |
| 3.1.4.3.2 cDNA第二链的合成 | 第67页 |
| 3.1.4.3.3 双链cDNA末端补平 | 第67-68页 |
| 3.1.4.3.4 平末端双链cDNA的纯化 | 第68页 |
| 3.1.4.3.5 Adaptor连接到cDNA末端 | 第68页 |
| 3.1.4.3.6 限制性内切酶Not Ⅰ酶切反应 | 第68-69页 |
| 3.1.4.3.7 使用Spin Column除去短链cDNA | 第69-70页 |
| 3.1.4.3.8 酵母双杂交载体的酶切和纯化 | 第70-71页 |
| 3.1.4.3.9 载体和cDNA文库的连接 | 第71页 |
| 3.1.4.3.10 连接重组质粒的转化 | 第71-72页 |
| 3.1.4.4 菌落PCR鉴定插入片段 | 第72-73页 |
| 3.2 实验结果和分析 | 第73-79页 |
| 3.2.1 水稻全株总RNA的提取 | 第73-74页 |
| 3.2.2 mRNA的分离 | 第74页 |
| 3.2.3 双链cDNA的合成 | 第74-75页 |
| 3.2.4 去除短片段后的cDNA | 第75-76页 |
| 3.2.5 酵母双杂交载体的酶切 | 第76-77页 |
| 3.2.6 载体和cDNA的连接及产物转化大肠杆菌 | 第77-79页 |
| 3.2.7 插入片段的鉴定 | 第79页 |
| 3.3 讨论 | 第79-81页 |
| 第4章 酵母双杂交筛选OsMADS15互作蛋白 | 第81-108页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第81-90页 |
| 4.1.1 实验菌种和质粒 | 第81-82页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第82页 |
| 4.1.3 实验试剂和溶液配制 | 第82-85页 |
| 4.1.4 实验方法 | 第85-90页 |
| 4.1.4.1 BD/bait载体的构建 | 第85-86页 |
| 4.1.4.2 酵母菌AH109的活化 | 第86页 |
| 4.1.4.3 酵母感受态细胞的制备 | 第86-87页 |
| 4.1.4.4 重组载体转化酵母 | 第87页 |
| 4.1.4.5 AD/prey的制备 | 第87-88页 |
| 4.1.4.6 BD/bait和AD/prey的共转化 | 第88-89页 |
| 4.1.4.7 β-半乳糖苷酶的活性的检测 | 第89页 |
| 4.1.4.8 pGADT7插入片段的扩增和测序 | 第89-90页 |
| 4.2 实验结果和分析 | 第90-105页 |
| 4.2.1 OsMADS15的克隆 | 第90-91页 |
| 4.2.2 OsMADS15和pGBKT7的连接 | 第91-93页 |
| 4.2.3 pGBKT7-OsMADS15自激活(self-activation)的检测 | 第93-94页 |
| 4.2.4 AD-library和BD-OsMADS15的共转化与筛选 | 第94-98页 |
| 4.2.5 阳性互作菌落中的pGADT7插入片段的扩增和测序 | 第98-101页 |
| 4.2.6 对测序得到的基因序列的分析 | 第101-103页 |
| 4.2.7 OsMADS15与互作基因的BIFC验证 | 第103-105页 |
| 4.3 分析和讨论 | 第105-108页 |
| 全文总结 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-125页 |
| 发表论文 | 第125页 |
