中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
中英文缩略语对照表 | 第13-16页 |
前言 | 第16-19页 |
研究现状、成果 | 第16-17页 |
研究目的、方法 | 第17-19页 |
材料和方法 | 第19-44页 |
1 动物实验 | 第19-34页 |
1.1 实验动物 | 第19页 |
1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
1.3 溶液配制 | 第20-23页 |
1.4 主要仪器及耗材 | 第23-24页 |
1.5 动物分组 | 第24页 |
1.6 有创血流动力学检测 | 第24-25页 |
1.7 动物组织的取材与处理 | 第25-27页 |
1.7.1 取材与固定 | 第25页 |
1.7.2 透射电子显微镜检测 | 第25页 |
1.7.3 脱水、透明与浸蜡 | 第25-26页 |
1.7.4 包埋 | 第26页 |
1.7.5 载玻片的清洗与挂胶 | 第26页 |
1.7.6 切片 | 第26-27页 |
1.8 病理实验 | 第27-30页 |
1.8.1 WGA染色 | 第27页 |
1.8.2 HE染色 | 第27-28页 |
1.8.3 冰冻切片油红O染色 | 第28页 |
1.8.4 甲苯胺蓝染色 | 第28页 |
1.8.5 AB-PAS染色 | 第28-29页 |
1.8.6 Masson染色 | 第29页 |
1.8.7 病理图像分析 | 第29-30页 |
1.9 Western蛋白印迹分析心肌组织自噬相关蛋白及TonEBP表达水平 | 第30-34页 |
1.9.1 组织匀浆 | 第30页 |
1.9.1.1 物品准备 | 第30页 |
1.9.1.2 操作过程 | 第30页 |
1.9.2 BCA试剂盒测定蛋白浓度 | 第30-31页 |
1.9.3 变性(SDS)不连续凝胶电泳 | 第31-32页 |
1.9.3.1 制胶 | 第31-32页 |
1.9.3.2 上样 | 第32页 |
1.9.3.3 电泳 | 第32页 |
1.9.4 电转膜(半干法) | 第32-33页 |
1.9.5 封闭 | 第33页 |
1.9.6 免疫反应 | 第33页 |
1.9.7 成像 | 第33页 |
1.9.8 Western blot结果分析 | 第33-34页 |
2 细胞实验 | 第34-43页 |
2.1 实验细胞 | 第34页 |
2.2 主要试剂及试剂盒 | 第34页 |
2.3 溶液配制 | 第34-36页 |
2.4 主要仪器及耗材 | 第36页 |
2.5 H9c2心肌细胞培养 | 第36-37页 |
2.5.1 H9c2心肌细胞传代 | 第36-37页 |
2.5.2 H9c2心肌细胞冻存 | 第37页 |
2.5.3 H9c2心肌细胞复苏 | 第37页 |
2.6 CoroNa Green测定细胞内Na~+ | 第37页 |
2.7 CCK-8实验检测NAC安全浓度 | 第37-38页 |
2.8 DCFH-DA探针检测H9c2心肌细胞内ROS产生水平 | 第38页 |
2.9 H9c2心肌细胞凋亡检测 | 第38页 |
2.10 荧光定量PCR法检测H9c2心肌细胞自噬相关基因Beclin1、LC3b、ATG9A、ATG16L1的mRNA表达情况 | 第38-42页 |
2.10.1 RNA提取 | 第38-39页 |
2.10.2 RNA定量及变性电泳 | 第39-40页 |
2.10.3 两步法逆转录合成cDNA | 第40页 |
2.10.4 cDNA定量 | 第40页 |
2.10.5 荧光定量PCR法检测H9c2心肌细胞自噬相关基因Beclin1、Ⅱb、ATG9A、ATG16L1及内参β-Actin的mRNA表达情况 | 第40-42页 |
2.10.5.1 物品准备 | 第40-41页 |
2.10.5.2 操作流程 | 第41-42页 |
2.11 Western蛋白印迹检测H9c2心肌细胞自噬相关蛋白表达水平 | 第42-43页 |
2.11.1 H9c2心肌细胞蛋白提取 | 第42-43页 |
2.11.2 BCA试剂盒测定蛋白浓度及Western blot检测(同1.9.2~1.9.8) | 第43页 |
3 统计学方法 | 第43-44页 |
结果 | 第44-62页 |
1 高盐负荷诱导SHR心肌由代偿性肥厚向失代偿性肥厚转变 | 第44-48页 |
2 心肌组织空泡样结构病理学与分子生物学分析 | 第48-53页 |
3 高盐负荷诱导自噬的相关机制 | 第53-62页 |
3.1 长期高盐负荷导致间质高渗改变 | 第53-54页 |
3.2 细胞实验证实细胞内Na~+浓度随细胞外Na~+浓度增加而增加 | 第54-55页 |
3.3 细胞外Na~+浓度增加使凋亡和细胞自噬相关基因与蛋白水平上调 | 第55-57页 |
3.4 细胞外Na~+浓度增加诱导ROS依赖性的自噬上调 | 第57-62页 |
讨论 | 第62-68页 |
1 高盐摄入与高血压性心脏病 | 第62-64页 |
2 高盐摄入加速诱导高血压性心脏病中细胞自噬 | 第64-65页 |
3 高盐摄入与氧化应激和细胞凋亡 | 第65-66页 |
4 氧化应激参与高盐摄入诱导自噬的关键环节 | 第66-68页 |
局限性和研究展望 | 第68-69页 |
结论 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-76页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第76-77页 |
综述 | 第77-93页 |
综述参考文献 | 第86-93页 |
致谢 | 第93页 |