| 中英文缩略词 | 第9-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 引言 | 第15-25页 |
| 一、肺癌的流行病学特征 | 第15-16页 |
| 二、MicroRNA的生物学作用机制 | 第16-19页 |
| 1. microRNA的简介 | 第16-17页 |
| 2. microRNA的作用机制 | 第17-18页 |
| 3. microRNA-652的研究进展 | 第18-19页 |
| 三、MicroRNA在肺癌中的研究进展 | 第19-23页 |
| 1. microRNA作为肺癌诊断和预后标志物的研究现状及进展 | 第19-21页 |
| 2. microRNA在肺癌发生发展中的作用 | 第21-22页 |
| 3. microRNA可作为肺癌潜在的治疗靶点 | 第22-23页 |
| 四、LLGL1简介及其与肿瘤的关系 | 第23-25页 |
| 实验材料 | 第25-29页 |
| 一、实验试剂 | 第25-27页 |
| 二、主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 三、溶液的配制 | 第28-29页 |
| 实验方法 | 第29-66页 |
| 一、非小细胞肺癌组织标本的收集 | 第29页 |
| 二、非小细胞肺癌细胞系及人正常肺上皮细胞系 | 第29-30页 |
| 1. 细胞的复苏 | 第29页 |
| 2. 细胞的培养和传代 | 第29-30页 |
| 3. 细胞的冻存 | 第30页 |
| 三、肿瘤组织与细胞系中总RNA的提取 | 第30-34页 |
| 1. 肿瘤组织中总RNA的提取 | 第30-32页 |
| 2. 细胞系中总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3. 纯化后RNA的定量检测与电泳分析 | 第33-34页 |
| 四、MicroRNA的实时荧光定量PCR检测(RT-qPCR) | 第34-37页 |
| 1. microRNA的反转录反应 | 第35页 |
| 2. microRNA的实时荧光定量PCR反应 | 第35-36页 |
| 3. 在ABI 7900HT PCR仪上设置PCR反应条件 | 第36-37页 |
| 五、RT-PCR半定量检测mRNA的表达水平 | 第37-39页 |
| 1. 反转录生成cDNA | 第37-38页 |
| 2. 半定量RT-PCR反应 | 第38-39页 |
| 六、细胞功能学实验 | 第39-51页 |
| 1. microRNA分子类似物及抑制分子的细胞转染实验 | 第39-40页 |
| 2. 细胞增殖实验 | 第40-41页 |
| 3. 细胞周期检测 | 第41-42页 |
| 4. 细胞凋亡检测 | 第42-44页 |
| 5. 克隆形成试验(平板法) | 第44-45页 |
| 6. 蛋白印迹法(Western Blot) | 第45-49页 |
| 7. 细胞迁移实验 | 第49-50页 |
| 8. 细胞侵袭实验 | 第50-51页 |
| 七、构建报告基因的质粒 | 第51-58页 |
| 1. 3’UTR区域的片段扩增和筛选 | 第52-54页 |
| 2. 质粒的扩增与回收 | 第54-57页 |
| 3. pCMV6-ENTRY-LLGL1表达质粒 | 第57-58页 |
| 4. 质粒浓度测定 | 第58页 |
| 八、双荧光素酶报告基因实验 | 第58-61页 |
| 九、Lgl1回复试验 | 第61-62页 |
| 十、免疫组化分析 | 第62-65页 |
| 1. 组织蜡块的制备 | 第62页 |
| 2. 组织切片 | 第62-63页 |
| 3. 石蜡切片的Hematoxylin-Eosin(HE)染色 | 第63页 |
| 4. 免疫组织化学染色 | 第63-65页 |
| 十一、统计方法 | 第65-66页 |
| 实验结果 | 第66-84页 |
| 一、miR-652-3p在肺癌组织中的表达水平及其与临床病理参数的关系 | 第66-69页 |
| 1. miR-652-3p在非小细胞肺癌组织中高表达 | 第66-68页 |
| 2. miR-652-3p表达升高促进了非小细胞肺癌的进展 | 第68-69页 |
| 3. miR-652-3p表达升高与非小细胞肺癌患者不良预后相关 | 第69页 |
| 二、miR-652-3p表达异常对非小细胞肺癌细胞系功能的影响 | 第69-76页 |
| 1. 肺癌细胞系中miR-652-3p表达水平的检测 | 第69-70页 |
| 2. 转染miRNA模拟物或抑制剂能有效改变细胞内miR-652-3p的表达水平 | 第70-71页 |
| 3. miR-652-3p促进了非小细胞肺癌细胞的增殖能力 | 第71-73页 |
| 4. miR-652-3p不影响非小细胞肺癌的细胞周期 | 第73-74页 |
| 5. miR-652-3p抑制了非小细胞肺癌细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 6. miR-652-3p促进了非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭能力 | 第75-76页 |
| 三、miR-652-3p通过调节下游靶基因LLGL1的表达发挥其促癌活性 | 第76-84页 |
| 1. 生物信息学预测miR-652-3p下游靶基因 | 第76-77页 |
| 2. 非小细胞肺癌细胞中Lgl1蛋白表达水平 | 第77-78页 |
| 3. miR-652-3p抑制下游靶基因Lgl1蛋白的表达 | 第78页 |
| 4. 非小细胞肺癌组织中miR-652-3p和Lgl1蛋白水平呈显著负相关 | 第78-80页 |
| 5. 双荧光素酶报告基因实验 | 第80-81页 |
| 6. Lgl1介导了miR-652-3p对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移能力的调节 | 第81-84页 |
| 讨论 | 第84-88页 |
| 小结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 基金资助 | 第100-101页 |
| 已发表与学位论文相关的英文论文 | 第101-102页 |
| 文献综述 | 第102-118页 |
| 参考文献 | 第110-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 个人简历 | 第120-121页 |
