| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 文献综述 | 第14-27页 |
| 第一章 气管黏膜上皮细胞的体外分离培养及其应用 | 第14-19页 |
| ·气管的组成 | 第14页 |
| ·气管的微细结构 | 第14-16页 |
| ·黏膜 | 第14-15页 |
| ·黏膜下层 | 第15-16页 |
| ·外膜 | 第16页 |
| ·气管的生理功能 | 第16页 |
| ·纤毛生理功能 | 第16页 |
| ·气管黏液和黏附功能 | 第16页 |
| ·气管黏膜上皮与呼吸道疾病 | 第16-17页 |
| ·气管黏膜上皮与猪革拉瑟氏病 | 第16-17页 |
| ·气管黏膜上皮细胞体外培养的应用 | 第17页 |
| ·检验和开发新药物的模型 | 第17页 |
| ·疾病发病机制的模型 | 第17页 |
| ·气管上皮细胞的体外培养 | 第17-19页 |
| ·猪气管上皮细胞分离培养的方法 | 第17页 |
| ·体外培养的气管上皮细胞的形态结构 | 第17-18页 |
| ·气管黏膜上皮细胞的鉴定 | 第18-19页 |
| 第二章 端粒、端粒酶与细胞永生化 | 第19-25页 |
| ·细胞永生化 | 第19-20页 |
| ·永生化的概念 | 第19页 |
| ·永生化的相关方法 | 第19-20页 |
| ·端粒、端粒酶 | 第20-23页 |
| ·染色体末端的复制 | 第20页 |
| ·端粒、端粒酶的结构和功能 | 第20-22页 |
| ·端粒、端粒酶在细胞永生化中的作用机制 | 第22-23页 |
| ·通过转染hTERT 基因而建立的永生化细胞系 | 第23-25页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌概述 | 第25-27页 |
| ·病原特征 | 第25页 |
| ·致病机理 | 第25页 |
| ·HPS 与猪气管上皮细胞共培养和黏附模型的建立 | 第25-27页 |
| 试验研究 | 第27-49页 |
| 第四章 猪气管上皮细胞的分离培养及生长特性的鉴定 | 第27-34页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·动物和组织来源 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·血清 | 第27页 |
| ·羊下丘脑粗提取物 | 第27页 |
| ·胰岛素-转铁因子-硒补充剂(ITS) | 第27页 |
| ·人表皮生长因子 | 第27-28页 |
| ·谷氨酰胺 | 第28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·缓冲液 | 第28页 |
| ·消化液 | 第28页 |
| ·免疫组织化学试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-30页 |
| ·完全培养液的配制 | 第29页 |
| ·猪气管上皮细胞的分离 | 第29页 |
| ·气管上皮细胞的原代培养 | 第29页 |
| ·气管上皮细胞的传代 | 第29页 |
| ·气管上皮细胞的纯化 | 第29-30页 |
| ·气管上皮细胞的鉴定 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-33页 |
| ·细胞的形态和特征 | 第30页 |
| ·气管上皮细胞的鉴定结果 | 第30页 |
| ·细胞生长曲线 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第五章 hTERT 基因转染猪气管上皮细胞的研究 | 第34-44页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·菌株、细胞与质粒 | 第34页 |
| ·工具酶和试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-39页 |
| ·质粒pCI-neo-hTERT 转化、扩增与鉴定 | 第34-35页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒转染猪气管上皮细胞 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR 检测永生化细胞中外源性hTERT 的表达 | 第36-37页 |
| ·Western Blot 检测永生化的细胞中外源性hTERT 蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·永生化的细胞鉴定 | 第38页 |
| ·MTT 法检测细胞活力情况 | 第38页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒扩增和酶切鉴定 | 第39页 |
| ·G418 对猪气管上皮细胞最佳筛选浓度的确定 | 第39页 |
| ·转染后阳性细胞的获得 | 第39页 |
| ·永生化的细胞hTERT 基因的RT-PCR 检测 | 第39-40页 |
| ·Western Blot 检测永生化的细胞中外源性hTERT 蛋白的表达 | 第40页 |
| ·永生化的STECs 的鉴定 | 第40-41页 |
| ·细胞活力曲线 | 第41-42页 |
| ·细胞周期测定 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第六章 副猪嗜血杆菌对气管上皮细胞黏附能力的研究 | 第44-49页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·菌株、细胞和试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| ·细胞培养 | 第44页 |
| ·细菌培养 | 第44-45页 |
| ·黏附试验 | 第45页 |
| ·菌液浓度对黏附作用的影响 | 第45页 |
| ·作用时间对黏附作用的影响 | 第45页 |
| ·数据处理分析 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-47页 |
| ·细胞形态 | 第45页 |
| ·HPS 对气管黏膜上皮细胞和血管内皮细胞的黏附作用 | 第45页 |
| ·黏附力的计算 | 第45页 |
| ·菌液浓度对黏附作用的影响 | 第45-46页 |
| ·作用时间对黏附作用的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·HPS 黏附气管上皮细胞模型的建立 | 第47-48页 |
| ·副猪嗜血杆菌对气管上皮细胞的黏附作用 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 个人简介 | 第60页 |
