| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 中英文缩写对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 引言 | 第13页 |
| 2 脂肪概述 | 第13-17页 |
| 2.1 脂肪组织的分类 | 第13-14页 |
| 2.1.1 白色脂肪组织 | 第13-14页 |
| 2.1.2 棕色脂肪组织 | 第14页 |
| 2.2 脂肪组织的生成 | 第14-15页 |
| 2.3 脂肪细胞分化的转录调控 | 第15-17页 |
| 2.3.1 PPARγ | 第15-16页 |
| 2.3.2 C/EBPα | 第16-17页 |
| 3 microRNA及其对脂肪细胞分化的调控 | 第17-21页 |
| 3.1 microRNA的生物合成和作用机制 | 第17-18页 |
| 3.2 miRNA对脂肪细胞分化的调控 | 第18-21页 |
| 3.2.1 miRNA促进脂肪细胞分化 | 第19-20页 |
| 3.2.2 miRNA抑制脂肪细胞分化 | 第20-21页 |
| 4 miR-425 可能是调控脂肪细胞分化的重要候选miRNA | 第21-23页 |
| 4.1 Zfp423基因与脂肪生成的相关研究 | 第21-23页 |
| 4.2 miR-425 的研究 | 第23页 |
| 5 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-42页 |
| 2.1 载体和菌株 | 第24页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 主要溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.4 细胞培养及诱导分化 | 第26-27页 |
| 2.4.1 细胞的复苏 | 第26页 |
| 2.4.2 细胞的常规培养 | 第26页 |
| 2.4.3 细胞冻存 | 第26-27页 |
| 2.4.4 3T3-L1细胞的诱导分化 | 第27页 |
| 2.5 细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第27-28页 |
| 2.5.1 细胞的转染 | 第27页 |
| 2.5.2 双荧光素酶相对活性的检测 | 第27-28页 |
| 2.5.2.1 细胞裂解 | 第27-28页 |
| 2.6 细胞总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.7 Q-PCR分析 | 第29-32页 |
| 2.7.1 miRNA的定量分析 | 第29-30页 |
| 2.7.2 基因的定量分析 | 第30-32页 |
| 2.8 油红O染色 | 第32页 |
| 2.9 甘油三酯和游离脂肪酸含量的测定 | 第32-33页 |
| 2.10 靶基因预测以及预测靶基因 3’UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第33-39页 |
| 2.10.1 靶基因预测 | 第33页 |
| 2.10.2 预测靶基因 3’UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第33-39页 |
| 2.11 靶基因的鉴定 | 第39页 |
| 2.12 Western blotting分析 | 第39-41页 |
| 2.12.1 蛋白提取 | 第39页 |
| 2.12.2 SDS-PAGE电泳 | 第39-40页 |
| 2.12.3 转膜 | 第40页 |
| 2.12.4 抗原抗体免疫反应 | 第40-41页 |
| 2.12.5 抗体 | 第41页 |
| 2.13 主要数据库及分析软件 | 第41页 |
| 2.14 统计学分析 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-51页 |
| 3.1 miR4255p序列保守性分析 | 第42页 |
| 3.2 miR4255p的组织表达谱分析 | 第42-43页 |
| 3.3 miR4255p的细胞表达谱分析 | 第43-44页 |
| 3.4 miR4255p抑制小鼠 3T3-L1前脂肪细胞的分化 | 第44-47页 |
| 3.5 miR4255p靶基因的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.6 miR4255p通过靶定Zfp423抑制脂肪细胞分化 | 第49-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 miR4255p的靶基因预测 | 第51-52页 |
| 4.2 miR4255p通过调控Zfp423的表达来抑制脂肪细胞分化 | 第52-53页 |
| 4.3 miR4255p抑制脂肪细胞分化的意义 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 5.1 本研究的主要成果 | 第54页 |
| 5.2 本实验不足之处及下一步计划 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
