| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-27页 |
| 第一章 防晒剂研究现状 | 第13-19页 |
| 1 紫外线概述 | 第13-15页 |
| 1.1 紫外线 | 第13页 |
| 1.2 紫外线照射引起的皮肤损伤及其机制 | 第13-15页 |
| 1.2.1 红斑作用 | 第14页 |
| 1.2.2 皮肤色素沉着 | 第14页 |
| 1.2.3 皮肤肿瘤 | 第14-15页 |
| 1.2.4 皮肤光老化 | 第15页 |
| 2 防晒剂 | 第15-19页 |
| 2.1 防晒剂的分类及防晒机理 | 第15-19页 |
| 2.1.1 紫外线吸收剂 | 第15-17页 |
| 2.1.2 紫外线屏蔽剂 | 第17页 |
| 2.1.3 生物工程类防晒剂 | 第17-19页 |
| 第二章 链霉亲和素蛋白相关研究 | 第19-26页 |
| 1 链霉亲和素研究概述 | 第19-23页 |
| 1.1 SA的主要理化特性 | 第20-21页 |
| 1.1.1 分子量 | 第20页 |
| 1.1.2 结合生物素的能力 | 第20页 |
| 1.1.3 活性 | 第20-21页 |
| 1.1.4 耐热性 | 第21页 |
| 1.2 融合蛋白纯化 | 第21-23页 |
| 1.2.1 亲和标签 | 第21-22页 |
| 1.2.2 多聚组氨酸标签融合蛋白Ni-NTA纯化 | 第22-23页 |
| 1.2.2.1 蛋白本身结构 | 第22页 |
| 1.2.2.2 缓冲体系,pH及盐浓度 | 第22页 |
| 1.2.2.3 表面活性剂及其他添加剂 | 第22-23页 |
| 2 FRET | 第23-26页 |
| 2.1 FRET原理 | 第23页 |
| 2.2 FRET适用条件 | 第23-24页 |
| 2.2.1 合适的距离 | 第23-24页 |
| 2.2.2 光谱要求 | 第24页 |
| 2.3 SA中的FRET | 第24-26页 |
| 本课题研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二部分 研究内容 | 第27-59页 |
| 前言 | 第27-28页 |
| 第一章 核心链霉亲和素基因克隆及原核表达纯化 | 第28-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 1.1 生化试剂与培养基 | 第28页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第28页 |
| 1.3 实验主要仪器 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-41页 |
| 2.1 链霉亲和素蛋白基因克隆 | 第29-31页 |
| 2.1.1 最终目的基因序列及PCR引物 | 第29-30页 |
| 2.1.2 菌种的培养和保存 | 第30页 |
| 2.1.3 Streptomyces avidinii基因组提取 | 第30页 |
| 2.1.4 链霉亲和素基因扩增 | 第30-31页 |
| 2.2 第一段八肽基因与SA的连接 | 第31-32页 |
| 2.3 类生物素八肽序列与SA的连接 | 第32-33页 |
| 2.4 基因SA1定点突变 | 第33-34页 |
| 2.5 克隆载体,SA2-pMD18-T构建 | 第34-36页 |
| 2.5.1 PCR产物的处理与纯化 | 第34页 |
| 2.5.2 加A处理 | 第34-35页 |
| 2.5.3 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.5.4 TA连接与转化测序 | 第35-36页 |
| 2.6 表达载体构建 | 第36-38页 |
| 2.6.1 表达载体似2-pET-24a的构建 | 第36-38页 |
| 2.6.1.1 质粒提取 | 第36-37页 |
| 2.6.1.2 酶切 | 第37页 |
| 2.6.1.3 产物割胶回收 | 第37-38页 |
| 2.6.1.4 T4连接 | 第38页 |
| 2.7 蛋白表达与纯化 | 第38-40页 |
| 2.7.1 蛋白诱导表达条件的优化 | 第38-39页 |
| 2.7.2 蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.7.2.1 多聚组氨酸标签的SA2蛋白纯化 | 第39页 |
| 2.7.2.2 YND标签的SA2蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.8 蛋白电泳 | 第40-41页 |
| 2.8.1 制胶 | 第40-41页 |
| 2.8.2 上样 | 第41页 |
| 2.8.3 电泳 | 第41页 |
| 2.8.4 染色和脱色 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-49页 |
| 3.1 SA、SA1基因组成 | 第41-42页 |
| 3.2 亲和素链霉菌基因组DNA提取 | 第42页 |
| 3.3 链霉亲和素基因扩增 | 第42-44页 |
| 3.3.1 基因SA扩增结果 | 第43页 |
| 3.3.2 基因SA1的获取 | 第43-44页 |
| 3.4 对SA1定点突变获取SA2 | 第44页 |
| 3.5 克隆载体SA2-pMD1 8-T构建 | 第44-45页 |
| 3.6 表达载体构建 | 第45-46页 |
| 3.7 蛋白诱导表达 | 第46页 |
| 3.8 标签蛋白SA2的纯化 | 第46-49页 |
| 3.8.1 多聚组氨酸标签SA2蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 3.8.2 YND标签的SA2蛋白表达纯化 | 第47-49页 |
| 4 讨论与分析 | 第49-50页 |
| 第二章 SA2的标记及荧光检测 | 第50-57页 |
| 1 材料与仪器 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-53页 |
| 2.1 蛋白透析 | 第50页 |
| 2.2 蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
| 2.2.1 试剂准备 | 第50-51页 |
| 2.2.2 标准曲线的测绘 | 第51页 |
| 2.2.3 蛋白浓度测定 | 第51页 |
| 2.3 蛋白浓缩及浓度测定 | 第51页 |
| 2.4 SA2的标记 | 第51-52页 |
| 2.5 蛋白荧光检测 | 第52-53页 |
| 2.6 细胞毒理性实验 | 第53页 |
| 3 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.1 蛋白质浓度测定 | 第53-54页 |
| 3.2 标记蛋白荧光检测结果 | 第54-55页 |
| 3.3 标记蛋白的细胞毒理性实验结果 | 第55-56页 |
| 4 讨论与分析 | 第56-57页 |
| 结论与展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第66-68页 |
