| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略字 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第20-30页 |
| 1.1 实验血液标本 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第21-27页 |
| 1.3.1 1M Tris-HCL溶液的配制 | 第21页 |
| 1.3.2 5M NaOH溶液的配制 | 第21页 |
| 1.3.3 0.5M EDTA溶液的配制 | 第21页 |
| 1.3.4 TE溶液的配制 | 第21页 |
| 1.3.5 2.5M HCL的配制 | 第21页 |
| 1.3.6 LB平板的配制 | 第21-22页 |
| 1.3.7 LB溶液的配制 | 第22页 |
| 1.3.8 50%甘油溶液的配制 | 第22页 |
| 1.3.9 5×TBE溶液的配制 | 第22-23页 |
| 1.3.10 0.5×TBE溶液的配制 | 第23页 |
| 1.3.11 S.O.C培养基的配制 | 第23页 |
| 1.3.12 DMEM培养基 | 第23-24页 |
| 1.3.13 1M Tris-HCL (PH=6.8) 100ml | 第24页 |
| 1.3.14 1.5M Tris-HCL (PH=8.8) 500ML | 第24页 |
| 1.3.15 4xLoading Sample Buffer 10ml | 第24页 |
| 1.3.16 10% SDS 100ml | 第24-25页 |
| 1.3.17 10% APS 1ml | 第25页 |
| 1.3.18 10X电泳缓冲液 1L | 第25页 |
| 1.3.19 10X转膜缓冲液 1L | 第25页 |
| 1.3.20 10XTBS | 第25-26页 |
| 1.3.21 TBST 1L | 第26页 |
| 1.3.22 5% milk 100ml | 第26页 |
| 1.3.23 5% BSA 10ml | 第26页 |
| 1.3.24 0.5moL/L EDTA乙二胺四乙酸 溶液 100ml | 第26页 |
| 1.3.25 细胞裂解液 | 第26-27页 |
| 1.3.26 20%BSA | 第27页 |
| 1.4 仪器 | 第27-30页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第30-45页 |
| 2.1 血液RNA提取 | 第30页 |
| 2.2 RNA的miRNA反转录 | 第30-31页 |
| 2.2.1 RNA加A尾 | 第30-31页 |
| 2.2.2 Poly（A）修饰的miRNA逆转录 | 第31页 |
| 2.3 引物稀释 | 第31页 |
| 2.4 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.4.1 细胞的复苏 | 第31页 |
| 2.4.2 细胞的传代 | 第31-32页 |
| 2.4.3 细胞的冻存 | 第32页 |
| 2.5 细胞转染 | 第32-34页 |
| 2.5.1 miRNA-149-5p靶基因筛选的转染 | 第32-33页 |
| 2.5.2 重组克隆质粒的细胞转染 | 第33-34页 |
| 2.6 HepG2细胞RNA的提取 | 第34页 |
| 2.7 CDNA反转录 | 第34-35页 |
| 2.8 荧光定量PCR | 第35页 |
| 2.9 HepG2细胞DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.10 分子克隆 | 第36-40页 |
| 2.10.1 PCR | 第36-37页 |
| 2.10.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| 2.10.3 胶回收 | 第37页 |
| 2.10.4 限制性内切酶双酶切 | 第37-38页 |
| 2.10.5 PCR产物纯化 | 第38页 |
| 2.10.6 连接目的片段与载体的连接反应 | 第38-39页 |
| 2.10.7 转化 | 第39页 |
| 2.10.8 菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 2.11 质粒小提 | 第40页 |
| 2.12 双荧光素酶报告基因实验 | 第40-41页 |
| 2.13 细胞蛋白样品制备 | 第41-42页 |
| 2.13.1 蛋白提取 | 第41页 |
| 2.13.2 用Bradford法测蛋白浓度 | 第41-42页 |
| 2.13.3 蛋白变性 | 第42页 |
| 2.14 蛋白免疫印迹实验 | 第42-44页 |
| 2.14.1 配胶 | 第42-43页 |
| 2.14.2 电泳 | 第43页 |
| 2.14.3 转膜 | 第43-44页 |
| 2.14.4 封闭 | 第44页 |
| 2.14.5 一抗封闭 | 第44页 |
| 2.14.6 二抗封闭 | 第44页 |
| 2.14.7 曝片 | 第44页 |
| 2.15 统计学分析 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-57页 |
| 3.1 miR-149-5p在T2DM及健康人群外周血液中表达情况 | 第45页 |
| 3.2 miR-149-5p表达水平与糖尿病临床指标及BMI指数的相关性分析 | 第45-47页 |
| 3.3 利用生物信息学方法预测miR-149-5p的靶基因 | 第47-48页 |
| 3.4 细胞水平上过表达及抑制miR-149-5p | 第48-50页 |
| 3.5 细胞水平上过表达或抑制miR-149-5p对靶基因的影响 | 第50-51页 |
| 3.6 生物信息学预测miR-149-5p与靶基因的潜在结合位点 | 第51页 |
| 3.7 IGFBP5克隆载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.8 双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-149-5p对IGFBP5的直接调控作用 | 第53-54页 |
| 3.9 蛋白免疫印迹实验进一步验证miR-149-5p对IGFBP5的调控作用 | 第54-55页 |
| 3.10 过表达或抑制miR-149-5p对胰岛素信号通路分子表达的影响 | 第55-56页 |
| 3.11 过表达或抑制miR-149-5p对AKT蛋白磷酸化水平的影响 | 第56-57页 |
| 4.讨论 | 第57-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 综述 | 第67-79页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
