| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-24页 |
| 1 环境对植物生长发育的影响 | 第16-18页 |
| 1.1 逆境对植物生长发育的影响 | 第16页 |
| 1.2 重金属对植物生长发育的影响 | 第16-18页 |
| 1.2.1 植物生理生化方面影响的研究 | 第17页 |
| 1.2.2 重金属对植物生长发育的分子生物学相关研究 | 第17-18页 |
| 2 金属硫蛋白的研究进展 | 第18-20页 |
| 2.1 金属硫蛋白 | 第18页 |
| 2.2 金属硫蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 2.3 金属硫蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 3 植物基因工程 | 第20-22页 |
| 3.1 植物转基因技术 | 第20-21页 |
| 3.2 转基因植株的鉴定方法 | 第21-22页 |
| 3.2.1 标记基因 | 第21页 |
| 3.2.2 分子标记 | 第21-22页 |
| 3.2.3 分子杂交 | 第22页 |
| 3.2.4 免疫技术 | 第22页 |
| 3.2.5 其他技术 | 第22页 |
| 4 本研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 芹菜Agmt2基因的克隆和表达分析 | 第24-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-28页 |
| 1.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 1.2 DNA提取和cDNA合成 | 第26页 |
| 1.3 引物设计和PCR扩增 | 第26-27页 |
| 1.4 荧光定量PCR系统 | 第27页 |
| 1.5 数据分析 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.1 芹菜中Agmt2基因获得和序列分析 | 第28-29页 |
| 2.2 植物中MT2多重序列比对分析 | 第29-30页 |
| 2.3 不同植物MT2的氨基酸组成、理化性质分析 | 第30-31页 |
| 2.4 AgMT2的进化树分析 | 第31页 |
| 2.5 二级结构预测和分析 | 第31页 |
| 2.6 不同芹菜Agmt2基因的组织特异性表达分析 | 第31-32页 |
| 2.7 不同芹菜中Agmt2基因在重金属胁迫下的表达分析 | 第32-33页 |
| 2.8 不同芹菜中Agmt2基因在逆境胁迫下的表达分析 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 芹菜AgMT2的蛋白纯化和功能鉴定 | 第36-44页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| 1.1 试验材料和试剂 | 第37页 |
| 1.2 感受态BL21(DE3)的制备 | 第37-38页 |
| 1.3 AgMT2蛋白载体构建 | 第38页 |
| 1.4 AgMT2蛋白表达和纯化 | 第38-39页 |
| 1.5 AgMT2蛋白含量测定 | 第39-40页 |
| 1.6 AgMT2蛋白的重金属抗性鉴定 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-43页 |
| 2.1 AgMT2蛋白含量测定 | 第40-41页 |
| 2.2 AgMT2蛋白电泳分析 | 第41-42页 |
| 2.3 AgMT2蛋白的重金属抗性鉴定 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 芹菜Agm2基因转化拟南芥的研究 | 第44-58页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 1.1 植物材料和试剂 | 第45页 |
| 1.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| 1.3 转基因表达载体构建 | 第46页 |
| 1.4 电击转化 | 第46页 |
| 1.5 侵染拟南芥 | 第46-47页 |
| 1.6 拟南芥种植 | 第47页 |
| 1.7 转基因植株的鉴定 | 第47-48页 |
| 1.7.1 培养基初次筛选 | 第47页 |
| 1.7.2 GUS染色再次筛选 | 第47页 |
| 1.7.3 PCR检测筛选 | 第47-48页 |
| 1.7.4 形态差异、抗性比较 | 第48页 |
| 1.8 各项生理指标测定 | 第48-49页 |
| 1.8.1 GSH含量测定 | 第48页 |
| 1.8.2 叶绿素含量测定 | 第48页 |
| 1.8.3 SOD活性测定 | 第48-49页 |
| 1.8.4 POD活性测定 | 第49页 |
| 1.9 数据分析 | 第49页 |
| 2 结果分析 | 第49-56页 |
| 2.1 转基因拟南芥植株的鉴定 | 第49-53页 |
| 2.1.1 T_0代转基因植株的鉴定 | 第49-51页 |
| 2.1.2 T_1代转基因植株的鉴定 | 第51-52页 |
| 2.1.3 T_2代转基因植株的鉴定 | 第52-53页 |
| 2.1.4 T_3代转基因植株的鉴定 | 第53页 |
| 2.2 GSH含量差异分析 | 第53-54页 |
| 2.3 叶绿素含量差异分析 | 第54页 |
| 2.4 SOD活性差异分析 | 第54-55页 |
| 2.5 POD活性差异分析 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 全文结论 | 第58-60页 |
| 创新之处 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录Ⅰ 胡萝卜bHLH家族转录因子的全基因组分析及其逆境下的响应 | 第70-92页 |
| 1 材料与方法 | 第72-74页 |
| 1.1 序列数据构建 | 第72页 |
| 1.2 植物材料和处理 | 第72-73页 |
| 1.3 表达谱测定 | 第73-74页 |
| 1.4 进化分析、序列比对和DcbHLH的特征鉴定 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-87页 |
| 2.1 胡萝卜DcbHLH家族转录因子的鉴定和分类 | 第74-75页 |
| 2.2 DcbHLH蛋白的多重序列比对 | 第75-82页 |
| 2.3 胡萝卜和其他生物bHLH蛋白的进化分析 | 第82-83页 |
| 2.4 胡萝卜不同组织中DcbHLH基因的表达分析 | 第83-85页 |
| 2.5 胡萝卜中DcbHLH基因响应不同逆境胁迫的表达分析 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 附录Ⅱ DcUSAGT1,一种UDP-葡萄糖:芥子酸糖基转移酶在紫胡萝卜肉质根中的鉴定和功能研究 | 第92-106页 |
| 1 材料与方法 | 第94-97页 |
| 1.1 序列数据构建 | 第94-95页 |
| 1.2 结构预测和基于结构的序列比对 | 第95页 |
| 1.3 植物材料和处理 | 第95页 |
| 1.4 DcUSAGT1基因的表达载体的构建 | 第95-96页 |
| 1.5 DcUSAGT1蛋白的纯化 | 第96页 |
| 1.6 酶活测定 | 第96-97页 |
| 1.6.1 最佳pH值和温度 | 第96-97页 |
| 1.6.2 动力学参数测定 | 第97页 |
| 1.7 HPLC测定 | 第97页 |
| 1.8 紫胡萝卜和非紫胡萝卜品种中DcUSAGT1基因的表达谱测定 | 第97页 |
| 1.9 胡萝卜体外USAGT活性测定 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-102页 |
| 2.1 DcUSAGT1的序列和结构分析 | 第97-99页 |
| 2.2 rDcUSAGT1活性观察 | 第99-100页 |
| 2.3 最佳温度和pH值的影响 | 第100页 |
| 2.4 rDcUSAGT1的动力学参数 | 第100页 |
| 2.5 6种胡萝卜品种肉质根中DcUSAGT1基因在不同阶段的表达谱 | 第100-102页 |
| 2.6 不同胡萝卜体外USAGT的活动 | 第102页 |
| 3 讨论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
